[发明专利]具有人源化FC-γ受体的非人动物

说明书

本发明提供了经基因修饰的小鼠及用于制备和使用所述小鼠的方法和组合物，其中所述基因修饰包括FcγRI蛋白的人源化。

本申请是申请号为201580019102.0、申请日为2015年4月8日、发明名称为“有人源化FC-γ受体的非人动物”的中国发明专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2015/024920的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2014年4月8日，申请号为61/977,037的美国申请的优先权。

相关专利申请

本申请要求2014年4月8日提交的临时申请No.61/977,037的优先权权益，该临时申请特此全文以引用方式并入本文。

背景技术

Fc受体(FcR)是存在于免疫系统的细胞表面上并可在哺乳动物体内发挥免疫系统的多种功能的蛋白质。FcRs以多种类型存在于多种细胞上，并且介导多种免疫功能，诸如与附着于受感染细胞或入侵性病原体的抗体结合、通过抗体介导的吞噬作用或抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)来刺激吞噬细胞或细胞毒性细胞破坏微生物或受感染细胞。

ADCC是免疫系统的效应子细胞裂解抗体所结合的靶细胞的过程。该过程依赖于预先暴露于外源抗原或细胞，从而产生抗体应答。可借助效应子细胞诸如自然杀伤(NK)细胞来介导ADCC，具体方式是使效应子细胞表面上表达的FcR与抗体的Fc部分结合，而抗体的Fc部分自身又与外源抗原或细胞结合。高亲和力FcγR1受体信号传导在免疫系统调节和效应子细胞功能方面起着重要作用。

发明内容

本发明涵盖这样的认识：希望对非人动物诸如小鼠进行工程化改造，以表达人或杂合FcγRI蛋白，从而可以对人免疫效应子应答进行实验，这种实验是不能在人体内开展的。

本发明还涵盖这样的认识：希望用人源化(人或杂合)FcγRI基因替换内源小鼠FcγRI基因。

在一些实施例中，本发明提供了表达FcγRI蛋白的小鼠，该蛋白包含人FcγRIα链的细胞外部分及小鼠FcγRIα链的细胞内部分。在一些实施例中，人FcγRIα链的细胞外部分包含EC1结构域、EC2结构域、EC3结构域，或它们的组合。

在一些实施例中，EC1结构域由与SEQ ID NO:3的外显子3具有至少50％、70％、85％、90％或95％同一性的外显子编码。

在一些实施例中，EC2结构域由与SEQ ID NO:3的外显子4具有至少50％、70％、85％、90％或95％同一性的外显子编码。

在一些实施例中，EC3结构域由与SEQ ID NO:3的外显子5具有至少50％、70％、85％、90％或95％同一性的外显子编码。

在一些实施例中，本发明提供了表达FcγRI蛋白的小鼠，该蛋白质包含人FcγRIα链的细胞外部分及小鼠FcγRIα链的细胞内部分，其中该小鼠无法可检测地表达全长小鼠FcγRIα链。在一些实施例中，FcγRIα链的细胞内部分包含整体或部分的小鼠FcγRIα链细胞质结构域。在一些实施例中，小鼠还表达包含整体或部分的小鼠FcγRIα链跨膜结构域的FcγRIα链。

在一些实施例中，本发明提供了表达与SEQ ID NO:5具有至少70％、85％、90％或95％同一性的FcγRIα链氨基酸序列的小鼠。在一些实施例中，人或杂合FcγRI蛋白可检测地表达于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突细胞和/或它们的组合上。

在一些实施例中，施用鼠粒细胞集落刺激因子(mG-CSF)会升高人FcγRI蛋白水平。在一些实施例中，施用鼠粒细胞集落刺激因子(mG-CSF)不会升高单核细胞、中性粒细胞或树突细胞中的小鼠FcγRI蛋白水平。