[发明专利]一种酪酸梭菌冻干粉、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及生物制品的技术领域，更具体地，本发明涉及一种酪酸梭菌冻干粉、制备方法及其应用。所述酪酸梭菌冻干粉，其包括酪酸梭菌和复合保护剂，按重量份计，所述复合保护剂包括15～35份脱脂奶粉、5～23份碳水化合物、1～5份抗坏血酸。本发明提供的酪酸梭菌冻干粉的抗冻能力强，‑45℃冻干40h仍能保持较高的活性，存活率高于79％，冻干粉活菌数大于8.6×10⁸cfu/g，提高了酪酸梭菌的保藏期，有利于后期产品的加工、储藏及运输。

技术领域

本发明涉及生物制品的技术领域，更具体地，本发明涉及一种酪酸梭菌冻干粉、制备方法及其应用。

背景技术

近年来，益生菌在功能性乳制品、保健食品、微生态制剂及医疗等领域得到广泛应用，具体是指一类对宿主有功能性健康益处的活性微生物，具有调节人体免疫功能、改善肠道菌群微生态平衡、降低血脂胆固醇、促进营养物质消化与吸收等优点。常见的益生菌有乳酸菌、双歧杆菌、酪酸梭菌及酵母菌等。酪酸梭菌作为机体肠道中最重要的生理性细菌，与人体的生长、新陈代谢密切相关，在人体健康和疾病方面起着重要的作用。

酪酸梭菌，又名丁酸梭菌，属于严格的革兰氏阳性芽孢杆菌。菌体呈直杆状或稍有弯曲，单个或成对存在，两端钝圆，芽孢偏心或次端生，呈圆形或椭圆形，发酵产酸，主要是丁酸、乙酸。研究表明，酪酸梭菌属专性厌氧，在贮存过程中活菌数量下降很快，4℃条件下冷藏也只能保藏5～7d，因此制备高活性酪酸梭菌菌粉至关重要，有利于后期产品的加工、储藏及运输。真空冷冻干燥技术是制备和保存酪酸梭菌最有效的方法之一，可以很好的保持菌体的生物活性。然而，酪酸梭菌在真空冷冻干燥技术中其抗冻性还有待提高，同时在保证抗冻性的前提下，其单位质量菌粉的活菌数也无法保证。

发明内容

针对现有技术中存在的一些问题，本发明第一个方面提供了一种酪酸梭菌冻干粉，其包括酪酸梭菌和复合保护剂，按重量份计，所述复合保护剂包括15～35份脱脂奶粉、5～23份碳水化合物、1～5份抗坏血酸。

作为本发明的一种优选地技术方案，所述碳水化合物选自蔗糖、麦芽糖、乳糖、麦芽三糖、海藻糖中一种或多种。

作为本发明的一种优选地技术方案，所述碳水化合物包括蔗糖和海藻糖，其重量比为1：(0.3～7.5)。

作为本发明的一种优选地技术方案，所述复合保护剂还包括2～10重量份菊粉。

作为本发明的一种优选地技术方案，所述酪酸梭菌冻干粉中酪酸梭菌的存活率大于79％，活菌含量大于8.6×10⁸cfu/g。

本发明第二个方面提供了一种所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其包括下面步骤：

(1)菌种培养：培养酪酸梭菌至对数生长期末期或稳定期初期，芽孢率大于80％，获得酪酸梭菌发酵液；

(2)收集菌体：将酪酸梭菌发酵液沉淀，获得湿菌泥；

(3)添加复合保护剂：按照湿菌泥：复合保护剂为(1～0.2)：(0.1～1)的重量比将湿菌泥和复合保护剂混合得到混合物；

(4)真空冷冻干燥：将混合物于25～37℃平衡20～60min，-45℃预冻6～12h，然后在3～8Pa下冷冻干燥16～28h，即得。

作为本发明的一种优选地技术方案，所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其包括下面步骤：

(1)菌种活化：在无菌室中，将低温保存的酪酸梭菌菌种溶解在20～30mL无菌生理盐水中，振荡混匀后按照体积比为2％～6％的接种量接种于梭菌增菌液体培养基中，35～38℃条件下厌氧培养7～12h，再按照相同接种量、培养条件在梭菌增菌液体培养基中连续活化2代，获得第3代液体活化培养物；

(2)扩大培养：将得到的第3代活化培养物进行一级种子培养和二级种子培养获得二级种子液体培养物；