[发明专利]一种酪酸梭菌冻干粉、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种酪酸梭菌冻干粉，其特征在于，其包括酪酸梭菌和复合保护剂，按重量份计，所述复合保护剂包括15～35份脱脂奶粉、5～23份碳水化合物、1～5份抗坏血酸。

2.根据权利要求1所述酪酸梭菌冻干粉，其特征在于，所述碳水化合物选自蔗糖、麦芽糖、乳糖、麦芽三糖、海藻糖中一种或多种。

3.根据权利要求2所述酪酸梭菌冻干粉，其特征在于，所述碳水化合物包括蔗糖和海藻糖，其重量比为1：(0.3～7.5)。

4.根据权利要求1所述酪酸梭菌冻干粉，其特征在于，所述复合保护剂还包括2～10重量份菊粉。

5.根据权利要求1～4任一项所述酪酸梭菌冻干粉，其特征在于，所述酪酸梭菌冻干粉中酪酸梭菌的存活率大于79％，活菌含量大于8.6×10⁸cfu/g。

6.一种根据权利要求1～5任一项所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其特征在于，其包括下面步骤：

(1)菌种培养：培养酪酸梭菌至对数生长期末期或稳定期初期，芽孢率大于80％，获得酪酸梭菌发酵液；

(2)收集菌体：将酪酸梭菌发酵液沉淀，获得湿菌泥；

(3)添加复合保护剂：按照湿菌泥：复合保护剂为(1～0.2)：(0.1～1)的重量比将湿菌泥和复合保护剂混合得到混合物；

(4)真空冷冻干燥：将混合物于25～37℃平衡20～60min，-45℃预冻6～12h，然后在3～8Pa下冷冻干燥16～28h，即得。

7.根据权利要求6所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其特征在于，其包括下面步骤：

(1)菌种活化：在无菌室中，将低温保存的酪酸梭菌菌种溶解在20～30mL无菌生理盐水中，振荡混匀后按照体积比为2％～6％的接种量接种于梭菌增菌液体培养基中，35～38℃条件下厌氧培养7～12h，再按照相同接种量、培养条件在梭菌增菌液体培养基中连续活化2代，获得第3代液体活化培养物；

(2)扩大培养：将得到的第3代活化培养物进行一级种子培养和二级种子培养获得二级种子液体培养物；

(3)菌种培养：将二级种子液体培养物按照体积比为2％～6％的接种量接种于液体发酵培养基中，35～38℃厌氧培养16～28h后，获得生长至对数生长期末期或稳定期初期且芽孢率大于80％的酪酸梭菌发酵液；

(4)收集菌体：将酪酸梭菌发酵液沉淀，获得湿菌泥；

(5)添加复合保护剂：按照湿菌泥：复合保护剂为(1～0.2)：(0.1～1)的重量比将湿菌泥和复合保护剂混合得到混合物；

(6)真空冷冻干燥：将混合物于25～37℃平衡20～60min，-45℃预冻6～12h，然后在3～8Pa下冷冻干燥16～28h，即得。

8.根据权利要求7所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其特征在于，所述液体发酵培养基的成分包括：8～15g胰蛋白胨、4～6g酵母浸粉、8～12g牛肉膏、1～5g硫酸铵、5～15g葡萄糖、1～5g可溶性淀粉、5～15g消化血清粉、1～5g醋酸钠、1～5g磷酸氢二钾、1～5g磷酸二氢钾、0.01～0.05g硫酸镁、1～5g碳酸钙、0.2～0.8g L-半胱氨酸，蒸馏水1000mL。

9.根据权利要求8所述酪酸梭菌冻干粉的制备方法，其特征在于，所述液体发酵培养基的成分还包括抗冻因子，所述抗冻因子选自甘露醇、谷氨酸钠、氯化钠中一种或多种。

10.一种根据权利要求1～5任一项所述酪酸梭菌冻干粉在保健食品、医疗生物制剂中的应用。