[发明专利]一种EGFR抗体及其应用

说明书

本公开提供一种EGFR抗体及其应用。具体的，本公开在尼妥珠单抗的基础上通过构建突变库筛淘获得，得到一个具有更高亲和力、更高ADCC杀伤活性的抗EGFR抗体或其抗原结合片段并将其用于癌症治疗。

技术领域

本公开属于生物技术领域，具体地，本公开提供一种EGFR抗体及其应用。

背景技术

表皮生长因子受体EGFR是细胞表面酪氨酸激酶家族的一员，广泛表达于表皮、多能细胞以及神经组织表面，在发育和分化过程中起关键作用。EGFR，或称HER1，c-erbB-1，是一个170kDa分子量的I型跨膜糖蛋白(ΜLlrich et al.,Nature,Vol.309,418-25,1986)，其配体包括EGF，转化生长因子TGFa，肝素结合活性的类EGF生长因子以及其他多种激素及细胞生长因子(Singh,A.and Harris,R.,2005,CellμLar Signaling 17:1183-1193)。配体结合引起EGFR二聚化及磷酸化，并诱导酪氨酸激酶信号级联反应，DNA合成及细胞分裂，因此EGFR信号通路是细胞存活于增殖的重要环节。

EGFR在多种上皮肿瘤中异常激活，包括非小细胞肺癌，乳腺癌，结肠癌，头颈部癌症以及前列腺癌等(Adams,G.and Weiner,L.,2005,Nature Biotechnology,23:1147-1157)。 EGFR受体异常激活的机制包括受体过度高表达，基因扩增，激活性突变，受体高表和/或调控缺失(Baselga,J.and Arteaga,C.,2005,J.of Clin.Oncol.23:2445-2459)。EGFR的异常激活成为多种肿瘤发生发展的驱动因素之一，因此，抑制与降低EGFR活性成为一种重要的抗肿瘤的治疗策略。

尽管EGFR高表和/或活性异常是多种肿瘤的驱动因素，但单抗药物获准治疗的适应症范围却相对有限，这与药物活性和病人耐受均有关系。如何提高药物有效性，同时降低毒副作用，仍是这一领域的待解决问题。

发明内容

本发明提供一种抗EGFR抗体或其抗原结合片段。具体的，本公开在尼妥珠单抗(Nimotuzumab，或mR3)的基础上通过构建突变库筛淘获得，得到一个具有更高亲和力、更高ADCC杀伤活性的抗EGFR抗体或其抗原结合片段。尼妥珠单抗(商品名泰欣生)因其与西妥昔单抗相比独特的靶点结合位点，临床应用中表现出优越的安全性；然而，相应的，其药效也具备可以提升的空间。

所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:3；所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4。

进一步地，所述重链可变区包含：如SEQ ID NO:7、8、9所述的重联HCDR1、 HCDR2、HCDR3；和/或

所述轻链可变区包含：如SEQ ID NO:10、11、12所述的轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3。

在一些实施方式中，上述可变区序列通过设计构建突变库并淘选获得。具体步骤如下：

步骤一：设计突变库以尼妥珠单抗重链为母本序列，设计方案将其抗原互补决定区(CDR)CDR1、CDR2、 CDR3进行有偏向的突变，同时将可变区固定序列肽段也反向翻译为核苷酸序列，与突变区一起拆分为多段寡聚核苷酸(oligos)，在前后相连的oligo间设计反向互补序列，分别于前后衔接的正义编码oligos有17-25个核苷酸的互补区段，这些反向互补序列将作为连接反应 (ligation)的模板。

设计尼妥珠单抗抗体重链基因突变库的编码DNA如SEQ ID NO:13所示。

正义编码寡核苷酸包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、所示序列。