[发明专利]一种酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法

权利要求书

1.一种酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，包括：

1)将包括潜在的与酪氨酸磷酸酶相互作用的底物的体系置于酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白、pup蛋白存在的条件下，并标记pup蛋白；

2)通过被标记的pup蛋白，富集潜在的与酪氨酸磷酸酶相互作用的底物；

所述酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白包括酪氨酸磷酸酶片段和PafA片段，所述酪氨酸磷酸酶片段具有底物捕获突变体。

2.如权利要求1所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶片段选自SHP1片段、SHP2片段、PTP1B片段、TCPTP片段、PTPRK片段以或CD45片段。

3.如权利要求1所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，其特征在于，所述步骤1)中，包括潜在的与酪氨酸磷酸酶相互作用的底物的体系为目标细胞，所述步骤1)具体为：在酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白、pup蛋白存在的条件下培养目标细胞，并标记pup蛋白。

4.如权利要求3所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，其特征在于，所述步骤1)还包括；将培养所获得的细胞裂解，以提供裂解液。

5.如权利要求3所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白和/或pup蛋白由目标细胞表达。

6.如权利要求1所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述pup蛋白包括pup片段和标签蛋白片段，所述标签蛋白选自生物素标签蛋白；

和/或，通过生物素标记pup蛋白；

和/或，所述步骤2)中，基于生物素-亲和素系统，通过被标记的pup蛋白，富集潜在的与目标蛋白相互作用的底物。

7.一种酪氨酸磷酸酶底物鉴定体系，包括酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白和pup蛋白的组合，所述酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白包括酪氨酸磷酸酶片段和PafA片段，所述酪氨酸磷酸酶片段具有底物捕获突变。

8.如权利要求7所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定体系，其特征在于，还包括潜在的与酪氨酸磷酸酶相互作用的底物的体系。

9.如权利要求7所述的酪氨酸磷酸酶底物鉴定体系，其特征在于，还包括用于标记pup蛋白的标记物。

10.一种表达系统，所述表达系统含有编码酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白和pup蛋白的多核苷酸的构建体或基因组中整合有外源的编码酪氨酸磷酸酶-PafA融合蛋白和pup蛋白的多核苷酸。