[发明专利]一种合成mcl-PHA的四种微生物混合发酵方法

权利要求书

1.一种合成mcl-PHA的四种微生物混合发酵方法，其特征是四种微生物为重组菌P.putida-acs KT2440；A.niger为中国微生物普通菌种保藏中心，编号为3.3928；酿酒酵母为S.cerevisiae L2612；醋酸杆菌经测序鉴定为A.orientalis。

2.一种合成mcl-PHA的四种微生物混合发酵方法，其特征是包括步骤如下：

1)：将所得到的保存在斜面培养基的A.niger菌种转接到新的试管斜面上，经过培养待长满孢子继续转接到其他试管斜面培养基上以备使用，分别将S.cerevisiae L2612、A.orientalis、P.putida-acsKT2440甘油菌接种至试管中，进行摇瓶培养制作种子液；

2)：将含有A.niger黑色菌丝体琼脂平板培养基切成琼脂小块，将其添加至淀粉原料培养基中，在摇床下进行培养，发酵生成葡萄糖水解液；

3)、使用糖化后的葡萄糖水解液作为底物，同时添加S.cerevisiae L2612与A.orientalis混合种子液，混合发酵生成含乙酸发酵液；

4)、使用3)中获得的乙酸发酵液作为底物，加入P.putida-acs KT2440种子液，在P.putida-acs KT2440胞内有效地积聚mcl-PHA。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤1)是将A.niger孢子在平板上画线生长形成黑色菌丝体分别将S.cerevisiae L2612、A.orientalis、P.putida-acsKT2440甘油菌接种至试管中，进行摇瓶培养发酵制作种子液。

4.如权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤2)将含有A.niger黑色菌丝体琼脂平板培养基切成长宽为0.5-1cm琼脂小块，将其添加至淀粉原料培养基中，在30℃，220r/min摇床下进行培养，发酵生成葡萄糖水解液。

5.如权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤3)S.cerevisiae L2612与Aorientalis的种子液依照体积比1∶1-60制成混合种子液，取接入步骤2)生成的葡萄糖水解液；并按照混合种子液∶步骤2)生成的含葡萄糖水解液体积比1∶33-200进行摇床混合培养发酵，生成含乙酸发酵液。

6.如权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤4)取P.putida-acsKT2440种子液并按照P.putida-acsKT2440种子液∶步骤3)生成的含乙酸发酵液体积比1∶33-200接种至步骤3)含乙酸发酵液中。