[发明专利]一种快速检测嘧霉胺残留的量子点免疫层析试纸条及制备方法

说明书

本发明提供一种快速检测嘧霉胺残留的量子点免疫层析试纸条及制备方法，所述免疫层析试纸条包括底板，以及依次拼接设于底板之上的样品垫、结合物释放垫、层析膜、吸水垫，结合物释放垫上包被有量子点标记的嘧霉胺抗体复合物。本发明相比与同类抗体的ELISA检测方法，极大的缩短了检测时间，提高了检测效率，并且检测灵敏度更高，对于样品中的嘧霉胺残留，可实现定量检测。

技术领域

本发明涉及食品安全免疫学检测技术领域，具体而言，涉及一种嘧霉胺残留量子点免疫层析试纸条及制备方法。

背景技术

嘧霉胺(Pyrimethanil)，属于苯胺基嘧啶类广谱杀真菌剂，通过抑制蛋氨酸的生物合成，影响细胞分裂以及蛋白质的形成，从而阻止病菌的侵染，具有根部内吸以及叶片穿透的活性。由于其优异的广谱杀菌特性，嘧霉胺被广泛用于蔬菜、水果以及观赏类植物，用于控制灰霉病等收获后疾病。但是，由于嘧霉胺在园艺物种上的广泛应用，长期研究表明对小鼠、大鼠等水生生物具有潜在的致癌性，加拿大在2018年确定嘧霉胺在西红柿以及洋葱中的最大残留量(MRL)为0.5和0.2mg/kg；欧盟对瓜类蔬菜中嘧霉胺的最大残留限量为0.7mg/kg((EC)No 396/2005)，我国也在谷物、蔬菜、水果以及干制坚果中对其进行了限量(GB 2763—2016)。

目前，用于蔬菜、水果等样品中嘧霉胺残留检测的方法主要是仪器方法和免疫分析方法。仪器分析方法包括气相色谱法，液相色谱法以及色谱-质谱联用技术。这些仪器方法虽然具有准确度高，可重复性并且可以定量的特点，但是需要昂贵的实验仪器、需要技术人员操作并且耗时。免疫分析方法已经报道的包括酶联免疫分析法(ELISA)和胶体金免疫层析法，但是，ELISA方法灵敏度低、步骤繁琐，不适合现场快速筛查；胶体金方法检测虽快，但试纸条受基质干扰大，检出限高，因此建立食品中嘧霉胺残留的高灵敏度快速检测方法具有重要意义。

量子点是一种新型的荧光纳米离子球形半导体材料，无毒无害，并且具有比有机染料优越的荧光特性。量子点通常由元素周期表中的II-VI型(例如CdSe，CdTe，CdS和ZnSe)或III-V型(例如InP和InAs)元素合成，通常用分子覆盖，用于表面功能化，用核、壳覆盖以修饰它们物理性质。例如CN109233836A公开了一种量子点荧光微球及其制备方法，用二氧化硅/硅氧烷涂层或双功能配体修饰制成水溶性量子点，并具有生物相容性。优良的发光性质且易于修饰的特性使得量子点成为新的生物标签，且其应用和性能优于传统的荧光蛋白和有机染料。目前，量子点已被广泛用做荧光标记物，用于检测蛋白以及其他小分子，在农药残留检测中也有广泛应用，但是在嘧霉胺的残留检测中未见报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种基于量子点偶联标记物的免疫层析试纸条，该试纸条对嘧霉胺残留灵敏度高，特异性好。本发明的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法。

本发明公开的第一个技术方案是：

一种快速检测嘧霉胺残留的量子点免疫层析试纸条，包括底板，以及依次拼接设于底板之上的样品垫、结合物释放垫、层析膜、吸水垫，结合物释放垫上包被有量子点标记的嘧霉胺抗体复合物。

进一步的，所述量子点为量子点荧光微球，该量子点荧微球是以NHS活化后的CdTe/ZnSe为核、二氧化硅为壳包裹的核-壳型纳米复合粒子；并且所述量子点表面连接有活性基团的核壳结构量子点，所述活性基团为-COOH。

进一步的，所述抗嘧霉胺抗体为抗嘧霉胺单克隆抗体、抗嘧霉胺多克隆抗体、人源细胞表达的抗嘧霉胺重组抗体其中之一。

进一步的，所述羧基化的核壳结构量子点与抗嘧霉胺单克隆抗体通过EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀亚酰胺)交联制备，抗嘧霉胺单克隆抗体：EDC：NHS的比例为18:1:18:12。