[发明专利]一种快速检测嘧霉胺残留的量子点免疫层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种快速检测嘧霉胺残留的量子点免疫层析试纸条，包括底板，以及依次拼接设于底板之上的样品垫(6)、结合物释放垫(5)、层析膜(2)、吸水垫(1)；其特征在于，结合物释放垫(5)上包被有量子点标记的嘧霉胺抗体复合物。

2.根据权利要求1所述的量子点免疫层析试纸条，其特征在于，所述量子点为量子点荧光微球，该量子点荧微球是以NHS活化后的CdTe/ZnSe为核、二氧化硅为壳包裹的核-壳型纳米复合粒子；并且所述量子点表面连接有活性基团的核壳结构量子点，所述活性基团为-COOH。

3.根据权利要求1所述的量子点免疫层析试纸条，其特征在于，所述抗嘧霉胺抗体为抗嘧霉胺单克隆抗体、抗嘧霉胺多克隆抗体、人源细胞表达的抗嘧霉胺重组抗体其中之一。

4.根据权利要求2或3所述的量子点免疫层析试纸条，其特征在于，所述羧基化的核壳结构量子点与抗嘧霉胺单克隆抗体通过EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀亚酰胺)交联制备，抗嘧霉胺单克隆抗体：EDC：NHS的比例为18:1:18:12。

5.根据权利要求1所述的量子点免疫层析试纸条，其特征在于，所述层析膜(2)上包被设置有与底板端面平行的检测线(4)和质控线(3)，检测线靠近样品垫，质控线靠近吸水垫；检测线包被有嘧霉胺完全抗原，该嘧霉胺完全抗原为0.9mg/mL的嘧霉胺-载体蛋白偶联物；所述质控线包被有羊抗鼠抗体，或兔抗鼠抗体。

6.制备权利要求1-5任意之一所述免疫层析试纸条的方法，其特征在于，a、样品垫的制备，将所述样本垫采用样本处理液浸泡处理，烘干；

b、将所述羧基化的核壳结构量子点与抗嘧霉胺单克隆抗体通过EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀亚酰胺)交联制备，后经缓冲液适当稀释后以4μL/cm的密度均匀喷在预处理的结合物释放垫的玻璃纤维膜上；

c、使用抗体包被缓冲液将嘧霉胺完全抗原包被到层析膜的检测线上，使用羊抗鼠多克隆抗体或兔抗鼠多克隆抗体稀释后包被到质控线上；

d、在所述底板上依次相互交错地压覆样本垫、结合物释放垫、层析膜和吸水垫，即得到量子点免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述层析膜为硝酸纤维膜，所述检测线表面包被有0.9mg/mL的嘧霉胺竞争抗原，所述质控线包被有0.4mg/mL羊抗鼠二抗IgG。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述嘧霉胺完全抗原通过嘧霉胺与蛋白载体偶联，并用浓度为0.9mg/mLPBS溶液调节嘧霉胺完全抗原包被物；所述蛋白载体包括牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，兔血清白蛋白(RSA)，钥孔血蓝蛋白(KLH)，甲状腺球蛋白(TG)任意其中之一。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，样品垫压覆在结合物释放垫边缘2～3mm；结合物释放垫压覆在层析膜边缘2～3mm；吸水垫压覆在层析膜边缘2～3mm，质控线与检测线之间相距5mm，检测线靠近样品垫，质控线靠近吸水垫，切割成3-4mm宽的量子点检测试纸条，干燥保存备用。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，样品垫材质为玻璃纤维膜，使用前经含1％BSA，1％蔗糖，0.1％PEG，0.05％吐温-20的PBS缓冲液，浸泡1小时后烘干备用。