[发明专利]多肽及其制备方法、抗p53蛋白的人工抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种多肽设计制备方法、一种抗p53蛋白的人工抗体及其应用。发明了一种同时嫁接天然抗体的两个CDR loop片段到纳米粒子上的方法，将天然抗体的两个CDR loop片段通过一个半胱氨酸拼接成一条多肽，并在其两端再各添加一个半胱氨酸；设计的多肽具有3个半胱氨酸，可以和纳米粒子形成3点固定，从而形成M形结构，模拟天然抗体的两个CDR loop正确相对位置和构象并共同完成识别抗原的功能。本发明涉及了一种靶向p53蛋白的金纳米抗体，由设计的一段含2个CDR loop拼接在一起组成的多肽修饰金纳米粒子而来。该金抗体能够特异性地靶向p53蛋白。本发明新型金纳米抗体，可特异性识别p53蛋白，当p53蛋白浓度很低时，金抗体依然可以保持与蛋白高的结合亲和力。

技术领域

本发明涉及一种金纳米抗体的设计和其用途，应用于生物纳米材料及生物医药技术领域。

背景技术

p53蛋白含有393个氨基酸，相对分子质量为53,000，因此被命名为p53蛋白。p53下游基因主要包括p21、MDM2、GADD45、CD95/fas、Bax、WT1、p53AIPI、pig3、Cyclin G等。p53下游靶基因直接参与细胞凋亡、生长周期、衰老、DNA修复等功能的形成，对肿瘤的抑制与形成密切相关。

近年来，纳米科技迅速发展，纳米药物在癌症治疗的效果方面越来越显著。公开号为CN105884888A的专利文献公开了一种基于金纳米粒子的人工抗体构建方法，以金纳米粒子作为骨架，嫁接天然抗体的单个互补决定区(complementarity determining region，CDR)片段(CDR loop)，通过构象控制制备得到具有天然抗体功能的的金纳米抗体的方法，只适用于天然抗体中由单个CDR loop起识别抗原的决定性作用的少数情况，对于大多数识别抗原需要同时使用两个CDR loop的情况无能为力，其中的关键难点是控制两个CDR loop的相对位置。因此限制了基于金纳米粒子的人工抗体的开发和应用，如何克服上述技术问题，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术问题，本发明的目的在于克服已有技术存在的不足，针对需要两个CDR loop起作用的天然抗体，发明了一种简单地同时嫁接两个CDRloop到金纳米粒子的方法。其主要特征是将两个CDR loop合并设计成一条多肽，并在这条多肽中设计3个与金纳米粒子的规定位点(半胱氨酸)，使这一条设计的多肽可以在金纳米粒子上形成“M”形的相连的两个loop结构，避免了分别连接两个单CDR loop产生的两个loop随机混乱的相对位置而没有活性的问题。本发明以p53抗原，将p53的天然抗体的两段CDR loop通过一个半胱氨酸拼接在一起，设计出了一种双环肽，通过调节多肽片段在金纳米粒子表面的跨度实现构象的调控，最终制备出一种能够靶向p53的新型金纳米抗体。本发明实现一种能够靶向p53蛋白的新型金纳米抗体的设计和其用途。

为达到上述发明创造目的，本发明采用如下技术方案：

一种多肽，为如下(1)和(2)中的任意一种多肽：

(1)含有序列1所示氨基酸序列的多肽；

(2)在不改变关键结合残基的条件下，将序列1所示的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失、和/或添加的由(1)衍生的多肽。

优选多肽的氨基酸序列如下：

CysAlaAlaSerGluAlaThrPheSerThrTyrAlaMetCysIleAsnTrpSerGlyThrThrThrTyrAlaCys

上述序列的氨基酸以单字母简写表示为：CAASEATFSTYAMCINWSGTTTYAC。