[发明专利]Rasal2蛋白第123位磷酸化特异性抗体、制备方法和ELISA检测试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及Rasal2第123位磷酸化抗体、其制备方法，检测Rasal2第123位磷酸化的ELISA检测试剂盒以及检测方法。本发明包括：合成S123位点磷酸化的抗原肽；利用该抗原肽与血兰蛋白偶联，得到免疫抗原，然后利用该抗原免疫动物并收集抗血清；鉴定和纯化抗血清，得到Rasal2第123位磷酸化特异性抗体；通过将Rasal2第123磷酸化抗体包被酶标板，并辅助其他检测材料，得到检测Rasal2蛋白第123磷酸化的ELISA检测试剂盒。本发明可用于鉴定组织样本中Rasal2蛋白第123磷酸化含量，操作简便，特异性强，灵敏度高，易于标准化。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及Rasal2第123位磷酸化抗体的制备和检测Rasal2第123位磷酸化的ELISA检测剂盒。

背景技术

现有技术公开了Rasal2作为RasGAP家族成员的一种，主要通过促进Ras-GTP水解为GDP形式，从而抑制Ras的活性，因此在大部分的肿瘤中，能够抑制肿瘤的发生和发展。有研究显示，在乳腺癌中，Rasal2却有着促进和抑制肿瘤生长两种不同的作用模式，Rasal2在管腔B型乳腺癌中低表达，并通过抑制Ras的活性，抑制肿瘤的生长和侵袭。然而在三阴性乳腺癌中，Rasal2过表达并且通过与ARHGAP24相互作用，激活RAC1从而促进细胞的侵袭和迁移。

研究公开了Ras过度激活是导致肿瘤发生和发展的一个重要因素。Rasal2被认为是一种肿瘤抑制因子，在大部分的癌症组织中表达偏低，如管腔B型乳腺癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌和鼻咽癌等等，然而，在三阴性乳腺癌(TNBC)中，Rasal2过表达，同时促进肿瘤的侵袭，发挥致癌作用，在结直肠癌，Rasal2通过上调LATS2/YAP1信号通路，能够促进结直肠癌的发生和发展，因此，Rasal2在癌症中的作用与肿瘤的不同类型以及同种肿瘤的不同亚型有关。

到目前为止，尚未有关于用作肿瘤发生发展检测标志的磷酸化Rasal2检测抗体。基于现有技术的基础与现状，本申请的发明人拟提供Rasal2蛋白第123位磷酸化特异性抗体、制备方法和ELISA检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的基础与现状，提供识别Rasal2蛋白S123磷酸化位点的特异性抗体及其制备方法。

本发明的进一步目的是提供检测Rasal2第123位磷酸化的ELISA检测试剂盒。

研究发现，即使Rasal2在乳腺癌中有着促进或抑制两种截然相反的作用，但是Rasal2第123位磷酸化，却在乳腺癌中有着普遍性和一致性，。该位点磷酸化后，能够有效诱导自噬的形成，保护细胞降低外界应激诱导的细胞凋亡，促进肿瘤细胞的增殖，同时通过临床数据显示，Rasal2第123位磷酸化与乳腺癌患者的预后和5年生存期成显著的负相关；研究结果说明Rasal2第123位磷酸化很有可能作为一个乳腺癌的biomarker，为乳腺癌的抗药性研究和精准治疗提供一定的参考依据，因此简便快速、高灵敏度的检测细胞或组织中Rasal2第123磷酸化水平的高低将对于疾病诊断、靶向药物的筛选等具有重要意义。

更具体的，

本发明提供了一种抗体，所述的抗体识别Rasal2蛋白第123位磷酸化。

该抗体通过以下方法制备：

使用含有Rasal2蛋白第123位磷酸化的抗原肽免疫动物并收集抗血清；

从抗血清中分离获得Rasal2第123位磷酸化抗体。

所述的抗原肽含有如下序列：EQQTDSTKGRC(SEQ ID NO 1)；制备所述抗原肽时，可以在前端或末端添加半胱氨酸(Cys)得到抗原肽。

在本发明的一个优选实施例中，EQQTDSTKGRC中的S为磷酸化位点，在E前加入一个C，获得图1所示的S123位点磷酸化(即Rasal2蛋白第123位磷酸化)的抗原肽。