[发明专利]虾青素提取物治疗2型糖尿病的方法与系统

说明书

本研究不同于以往的其它研究，应用生物学方法探讨虾青素提取物对2型糖尿病治疗的作用机制。以骨骼肌细胞作为实验对象，构建阻断P13/Akt信号通路的实验组，再给予虾青素提取物，分析肝细胞相关糖类基因表达，探讨虾青素提取物对2型糖尿病治疗的细胞机制。目前，本项研究国内外尚未见报道。所以虾青素提取物提供了一个新颖的治疗方法。用此方法可节省许多购买db/db小鼠和双基因敲除小鼠的经费问题。本研究通过测定胰岛素受体底物P‑IRS‑1的蛋白表达水平，再则探测虾青素提取物对小鼠成肌细胞株(C2C12)胰岛素敏感性的影响，为2型糖尿病的治疗提供理论依据。

技术领域

虾青素提取物对肥胖相关疾病(如2型糖尿病)治疗领域，尤其涉及验证虾青素提取物对2型糖尿病治疗的可行性。

背景技术

研究显示，糖尿病已经成为一种严重威胁人类健康的内分泌代谢性疾病。在糖尿病患者中，II型糖尿病占95％以上。II型糖尿病主要是由外周胰岛素抵抗和B细胞分泌功能减退两者交互作用所致。单纯存在胰岛素抵抗并不必然导致II型糖尿病。因此，理想的II型糖尿病的治疗手段应该兼顾以上两种发病机理。

虾青素化学名称为3，3′-二羟基-4，4′-二酮基-β，β′-胡萝卜素，为萜烯类不饱和化合物，是迄今为止人类发现自然界最强的抗氧化剂，具有多种生理功效，具有促进细胞再生能力，其降血糖作用尤为显著，且无明显副作用，不良反应低，耐受性好，对糖尿病的治疗有着重要的作用。

虾青素提取物具有显著降低糖尿病小鼠血糖的作用。可能与它高效清除人体内的自由基有关，但其作用机制仍需进一步研究，通过测定胰岛素受体底物P-IRS-1的蛋白表达水平，再则探测虾青素提取物对小鼠成肌细胞株(C2C12)胰岛素敏感性的影响，为2型糖尿病的治疗提供理论依据。

目前，国内外证实虾青素提取物效果及作用机制是采用野生型、Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-双敲除小鼠和db/db小鼠做对照实验，通过检测各传导通路活性、相关基因检测，验证虾青素提取物对2型糖尿病的改善作用。虾青素提取物显著降低了甘油三酸酯含量和氧化应激，减少编码促炎细胞因子基因的表达水平。其中Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-双敲除小鼠和db/db小鼠来源少、价格昂贵，不适实合实验室推广。我们采用的是廉价的C57BL/6小鼠，通过虾青素提取物对AMPK所介导的信号通路影响检测来达到同样的效果，适合实验室推广。

发明内容

为了克服Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-双敲除小鼠和db/db小鼠动物模型难以实现问题，本发明提前构建2型糖尿病小鼠模型，进一步对小鼠进行各项指标检测。组织学水平，对比观察普通小鼠对照组(NC)、II型糖尿病小鼠组(DM)、给低剂量虾青素提取物小鼠组(DM+L)、给高剂量虾青素提取物小鼠组(DM+H)的组织特征；细胞水平，虾青素提取物改善C2C12细胞胰岛素敏感性；分子水平，对各组小鼠血清中相关指标进行生化检测，重点监测肝脏中各项相应指标含量，测定各组小鼠血胰岛素含量；基因水平，检测肝脏中糖代谢相关酶PEPCK mRNA，C2C12细胞中GLUT4 mRNA表达的测定；综合检测虾青素提取物对 PI3K/Akt信号通路影响。

本发明通过构建2型糖尿病小鼠模型克服了β细胞基因敲除小鼠的高成本问题，简化了验证虾青素提取物对肥胖相关疾病(如2型糖尿病)治疗效果实验。为虾青素提取物疗效的验证性实验提供一种新型、简便的方法与系统，一定程度上推动虾青素提取物开发和临床治疗的进展，具有良好的推广性和可行性。

具体实施方式

1.2型糖尿病小鼠模型的制备和分组处理及组织学检查