[发明专利]抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体及其检测试剂盒

说明书

本发明公开的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体针对的抗原表位位于猪瘟病毒E2蛋白的第1~50位氨基酸和/或第51~100位氨基酸。本发明还公开了抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体的制备方法及其应用。本发明还公开猪瘟病毒定性或定量检测试剂盒。本发明通过定向克隆猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的E2蛋白第1~50位氨基酸或第51‑100位氨基酸对应的基因片段，表达得到的蛋白进行免疫动物得到能分泌2株抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体的杂交细胞瘤。本发明可以很好地检测出样本中的E2蛋白，并进一步定量，从而控制疫苗的质量。

技术领域

本发明本发明属于生物医学技术领域，具体涉及抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体及其检测试剂盒，可广泛用于猪瘟疫苗的检验、污染猪瘟病毒样本的鉴定等。

背景技术

猪瘟(Classical swine fever，CSF)是一种具有重要经济意义的猪高度传染性疾病，也是世界上最重要的与猪相关的疾病之一。CSF的爆发会给养猪业带来严重的经济损失。尽管在中国开展了全国性的疫苗接种计划，但仍然无法根除。世界上各个国家都在密切关注着该传染病，同时也属于我国计划要扑灭的重大动物疫病之一。我国是生猪生产和消费大国，生猪的饲养量大约达到了全球的1/2，而CSF更是各个年龄段猪相对易感染的疾病。CSF在我国流行极为普遍，因而逐渐成为了影响中国养猪业发展的重要因素之一。近些年虽然没有大型规模CSF疫情的爆发，但猪瘟病毒感染、临床表现和流行形式等愈发复杂，慢性感染和亚临床感染病例的数量不断上升，多种疾病普遍混合感染等都加大了CSF诊断与防控的难度。

在猪瘟病毒(CSFV)编码的蛋白中，E2蛋白的保守性最低、最易变异，但却是高免疫原性病毒包膜蛋白，是诱导中和抗体的主要抗原，对CSFV感染具有保护作用。近年来，国内外学者对其分子免疫学方面展开了广泛的研究。E2蛋白共编码370个氨基酸残基，分子量大小为53-55KDa。E2蛋白氨基酸有6个N-糖基化位点和1个O-糖基化位点，可以通过半胱氨酸间形成的二硫键形成E2-E2同源二聚体或者E1-E2异源二聚体，共同参与病毒对宿主细胞的吸附和入侵。在E2蛋白的N端有一段信号肽，它介导E2蛋白向内质网和细胞表面转运。在其C端的远端区域是一段疏水性很高的跨膜区，使E2-E1或E2-E2二聚体锚定在细胞膜上。

1989年Wensvoort等应用针对E2蛋白的各种单克隆抗体，发现了E2蛋白含有4 个抗原结构域，即A、B、C、D。在A区第829-837位氨基酸之间的中和线性表位 TAVSPTTLR，被单克隆抗体WH303所识别。糖蛋白E2在CSFV的生命周期中起着多种作用，如病毒附着、进入靶细胞、细胞向性和毒力。它是CSFV中最具免疫原性的蛋白质，能诱导中和抗体来抵抗强毒的攻击。因此建立CSFV血清学检测方法时首选抗原就是E2蛋白。E2蛋白对于病毒的吸附和感染过程至关重要，因此深入研究E2糖蛋白抗原的结构能够为新型疫苗和检测方法的进一步研究奠定了基础。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是研制出不同表位的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体。

本发明还要解决的技术问题是提供了抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体的制备方法。

本发明还要解决的技术问题是提供了所述的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体在制备猪瘟病毒检测试剂盒方面的应用。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种双单抗夹心单克隆抗体。

本发明利用酶标记单抗，可以建立竞争ELISA，从而检测血清中的抗猪瘟病毒的抗体，同时评价免疫动物的免疫保护效果。

本发明最后要解决的技术问题是提供了一种猪瘟病毒定性或定量以及E2表达蛋白定性或定量检测试剂盒。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体针对的抗原表位位于猪瘟病毒E2蛋白的第1～50位氨基酸和/或第51～100位氨基酸。