[发明专利]一种人工熊胆粉的制作工艺

权利要求书

1.一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于，包括用于将牛磺鹅去氧胆酸转换为牛磺熊去氧胆酸的生物转化步骤：包括含有禽畜胆粉、转化缓冲液和转化液的转化体系；所述转化液为包含酶菌体的菌悬液或者包含酶菌体的原生质体的上清液；所述酶菌体表达有7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶。

2.根据权利要求1所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于，所述菌悬液的制备方法为：将酶菌体分散于转化缓冲液中，获得菌悬液；所述上清液的制备方法为：对所述菌悬液中的酶菌体进行破碎处理后，离心获得上清液。

3.根据权利要求2所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于，所述酶菌体为表达有7α-羟基类固醇脱氢酶的工程菌A和表达有7β-羟基类固醇脱氢酶的工程菌B组成的混合物；或者所述酶菌体为同时表达有7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶两种酶的工程菌C。

4.根据权利要求3所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于，每10g酶菌体使用20-100ml转化缓冲液分散，获得菌悬液；表达有7α-羟基类固醇脱氢酶的工程菌A和表达有7β-羟基类固醇脱氢酶的工程菌B的质量比为1:10-1:2。

5.根据权利要求4所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：所述转化缓冲液为0-15mM的甘氨酸缓冲液；所述转化液的体积为转化体系的体积的1/5-4/5。

6.根据权利要求5所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：辅酶Ⅰ或者辅酶Ⅱ在转化体系中的浓度为0.1-5mM，禽畜胆粉在转化体系中的浓度为50-250g/L。

7.根据权利要求6所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：所述转化体系的pH值为6.0-9.0；所述转化体系进行酶促反应的温度为20-30℃，时长为2-24h。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：7α-羟基类固醇脱氢酶的基因的序列为SEQ ID NO:1；7β-羟基类固醇脱氢酶的基因的序列为SEQID NO:3；控制7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶的基因的表达的操纵子均为乳糖操纵子。

9.根据权利要求8所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：在所述生物转化步骤之前还包括发酵步骤：使用IPTG诱导工程菌A表达7α-羟基类固醇脱氢酶，并使用IPTG诱导工程菌B表达7β-羟基类固醇脱氢酶；或者使用IPTG诱导工程菌C同时表达7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶。

10.根据权利要求9所述的一种人工熊胆粉的制作工艺，其特征在于：在所述生物转化步骤之后还包括人工熊胆粉制备步骤：转化体系经生物转化步骤的酶促反应获得反应液，除去所述反应液中的沉淀，再经浓缩获得浸膏；使用乙醇溶液分散浸膏，获得浸膏分散液；除去浸膏分散液中的沉淀，经浓缩和干燥处理之后获得人工熊胆粉。