[发明专利]一种EPA/ARA型缩醛磷脂的制备方法及其应用

说明书

本发明属于活性物质筛选技术领域，一种EPA/ARA型缩醛磷脂的制备方法与应用。用PLA1酶连续水解磷脂复合物，然后利用超临界CO₂流体萃取技术从酶解磷脂中提取得到EPA/ARA型缩醛磷脂。本发明所制备的EPA/ARA型缩醛磷脂，纯度在80％以上，与EPA型缩醛磷脂或者ARA型缩醛磷脂相比，更有显著降低阿尔兹海默病症小鼠的行为认知功能，改善大脑Aβ聚集，Tau蛋白聚集，可用于制备预防和治疗阿尔兹海默病症等疾病的药物，具有广阔的市场应用前景。

技术领域：

本发明属于活性物质筛选技术领域，具体涉及一种EPA/ARA型缩醛磷脂的制备方法与应用。

背景技术：

阿尔茨海默症(Alzheimer'sdisease,AD)是一种神经退行性疾病，是目前最常见和最具破坏性的痴呆症，被世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)认定为全世界公共卫生的首要问题之一。阿尔兹海默症患者的海马和皮质会发生萎缩，最重要的神经病理学标志是Tau蛋白的过度磷酸化以及神经原纤维缠结的过度积累和淀粉样蛋白β(Amyloidbeta,Aβ)形成的淀粉样斑块沉积。更重要的是，阿尔兹海默症有较高的致死率。令人遗憾的是，目前AD的药物治疗仍处于初期阶段，可提供症状缓解但不会减缓疾病进展，由于社会和医疗保健的高成本，高患病率和死亡率，同时又缺乏有效的治疗方式，阿尔茨海默症已经成为一个亟待迫切解决的问题。

缩醛磷脂(Plasmalogen)是一类独特的膜甘油磷脂，其甘油骨架的sn-1位为具有烯醚键的长链烯醇，sn-2位则多为多不饱和脂肪酸。缩醛磷脂广泛存在于动物组织中，构成细胞膜磷脂成分的15-20％，在脑、心、肾等中含量较高(≥50％)。阿尔茨海默病(AD)患者脑组织和血清中乙醇胺缩醛磷脂(PlsEtn)水平降低，而在早期AD阶段中缩醛磷脂含量显着降低40mol％，早期在灰质中降低10mol％。同时越来越多的研究表明，缩醛磷脂缺乏以及全身过氧化物酶体功能障碍也可能是AD病理学的特异性标志物。外源性缩醛磷脂也已被证明具有多种生物活性。缩醛磷脂对体外巨噬细胞化学缺氧和ROS发生器具有很强的易感性，也可抑制Neuro2a细胞凋亡。因此膳食摄入缩醛磷脂是可能的阿尔兹海默症的治疗方法之一，但是EPA/ARA型缩醛磷脂改善老年痴呆的研究尚未被报道。

必需脂肪酸在大脑中起关键作用，并调节阿尔茨海默氏病(AD)改变的许多过程，其中必需脂肪酸可以细分为omega-3和omega-6两种。主要的omega-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等，而主要的omega-6脂肪酸是花生四烯酸(AA)与亚油酸(LA)。大脑中，AA、EPA和DHA是最重要的三种脂肪酸，构成了大多数的游离脂肪酸。花生四烯酸及其产物已经被证明参与大脑的多种功能，包括信号传递，神经递质释放，神经元基因表达，睡眠周期调节等。AA摄入已经被证明可以促进细胞存活并增强神经元的生长。AA代谢异常也与许多大脑和心理疾病有关，例如癫痫，中风，阿尔茨海默氏症，帕金森氏症，精神分裂症和情绪障碍。而对EPA的功能探究，目前更多的证明了其在抑制炎症以及神经保护的作用，同时神经退行性疾病病人大脑中的EPA水平也被证明下降。

目前缩醛磷脂的提取方法包括有机试剂提取纯化以及酶法转化后有机试剂提取，采用这以上方法有几种问题：第一，游离脂肪酸无法完全去除；第二，溶血性磷脂与缩醛磷脂很难实现完全分离，同时又具有溶剂残留的缺点，这都将限制其应用范围。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是目前缩醛磷脂的提取方法包括有机试剂提取纯化以及酶法转化后有机试剂提取，采用这以上方法有几种问题：第一，游离脂肪酸无法完全去除；第二，溶血性磷脂与缩醛磷脂很难实现完全分离，同时又具有溶剂残留的缺点，这都将限制其应用范围。

为解决上述问题，本发明首次采用了利用PLA1水解作用以及酰基迁移的原理，连续水解杂质磷脂的sn-1与sn-2位脂肪酸，得到极性相异的α-甘油磷脂，之后利用超临界CO₂流体萃取技术从酶解磷脂中提取得到缩醛磷脂，实现了缩醛磷脂的工业化。