[发明专利]mNGS检测SARS-CoV-2的扩增引物组及其应用

权利要求书

1.一种mNGS检测SARS-CoV-2的扩增引物组，其特征在于，包括：随机引物和SARS-CoV-2特异性引物，所述随机引物为5-7bp的寡核苷酸，所述SARS-CoV-2特异性引物为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：32的引物组合。

2.根据权利要求1所述的mNGS检测SARS-CoV-2的扩增引物组，其特征在于，所述SARS-CoV-2特异性引物的工作浓度为4±0.5p mol/20μl。

3.权利要求1-2任一项所述的mNGS检测SARS-CoV-2的扩增引物组在制备检测SARS-CoV-2的试剂和/或设备中的应用。

4.一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的mNGS检测SARS-CoV-2的扩增引物组。

5.根据权利要求4所述的检测SARS-CoV-2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测鼻拭子、咽拭子、痰液或肺泡灌洗液样本。

6.一种用于非疾病诊断的科研目的的检测SARS-CoV-2的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：取生物样本，提取RNA，得RNA样本；

S2：以DNA去除体系去除所述RNA样本中的DNA，得RNA纯品；

S3：以上述RNA纯品为模板，使用权利要求1-5任一项所述的扩增引物组，在反转录条件下，采用RT-PCR技术对SARS-CoV-2基因组进行靶向富集，每一条引物由3’端开始延伸，合成第一链cDNA；

S4：在一链合成反应结束后，加入二链合成酶和二链合成缓冲液，合成双链cDNA；

S5：以双链cDNA为模板，进行转座酶建库，再进行文库PCR扩增；

S6：对扩增后的文库进行纯化，以测序平台进行测序；

S7：以生物信息学分析方法去除检测得到的宿主序列，获得SARS-CoV-2基因组信息。

7.根据权利要求6所述的检测SARS-CoV-2的方法，其特征在于，

所述步骤S2中，所述DNA去除体系中包括RNA酶抑制剂、DNA酶、DNA酶缓冲液以及无核酸酶水；并且，去除DNA后进行磁珠纯化；

所述步骤S4中，合成双链cDNA反应结束后，进行磁珠纯化和Qubit定量；

所述步骤S5中，以1ng纯化定量后的双链cDNA为模板，所述转座酶建库的具体方法为：采用诺唯赞TN501转座酶体系进行片段化和加接头，片段化结束后加入片段化反应终止液，随后加入带标签的引物进行文库的PCR扩增。