[发明专利]一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂及其制备方法。本发明以减毒沙门氏菌为载体传送DNA疫苗，通过口服肠溶胶囊有效到达肠道低毒感染送DNA疫苗到肠道内皮细胞，通过巨噬细胞吞噬细菌，表达特异性分子COVID‑19‑S，被免疫细胞识别，从而在哺乳动物(老鼠、人等哺乳动物体内)达到产生特异性的抗体中和COVID‑19‑S蛋白从而达到，免疫的效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂及其制备方法。

背景技术

目前市场没有任何新型冠状病毒COVID-19的疫苗，目前防止感染的方法就是隔离，不能有效防止第二次、第三次等感染的爆发。疫苗是唯一可以防止大规模爆发的工具。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂及其制备方法。本发明以减毒沙门氏菌为载体传送DNA疫苗，通过口服肠溶胶囊有效到达肠道低毒感染送DNA 疫苗到肠道内皮细胞，通过巨噬细胞吞噬细菌，表达特异性分子COVID-19-S，被免疫细胞识别，从而在哺乳动物(老鼠、人等哺乳动物体内)达到产生特异性的抗体中和COVID-19-S蛋白从而达到，免疫的效果。

为达到上述技术效果，本发明的技术方案是：

一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂，包括减毒菌体，减毒菌体内含有表达特异性分子COVID-19-S的DNA序列，DNA序列如SEQ NO.3所示。

进一步的改进，所述减毒菌体为减毒沙门氏菌，所述DNA序列负载在pCMV载体上。

进一步的改进，所述减毒菌体处于0号肠溶胶囊内，0号肠溶胶囊内填充有200μl30％甘油的PBS悬液。

进一步的改进，0号肠溶胶囊内的减毒菌体数为(0.1-10)×10⁷个。

一种口服后产生新型冠状病毒抗体的制剂的制作方法，包括如下步骤：

步骤一、SEQ NO.1和SEQ NO.2所示的DNA序列作为引物，以pKD3为模板进行PCR获得片段,片段的序列如SEQ NO.4所示；片段用于进行同源交换；

步骤二、将带有pKD46质粒的野生型鼠伤寒沙门氏菌扩繁培养并制作L感受态细胞；

步骤三、将步骤一中的获得的片段导入L感受态细菌形成转化体；然后将转化体在含有浓度为50μg/mL的氯霉素的LB琼脂培养板上生长过夜，然后PCR检测得到阳性克隆的转化体，阳性克隆的转化体在42℃划单菌落培养去掉野生型鼠伤寒沙门氏菌内的pKD46质粒，然后向去掉pKD46质粒的野生型鼠伤寒沙门氏菌内的导入pCP20质粒获得无抗性ΔSTM1231基因突变菌株SD1231，即获得减毒菌体；

步骤四、将表达特异性分子COVID-19-S的DNA序列负载在pCMV质粒上，得到pCMV-COVID-19-S转化到菌株SD1231内获得阳性菌株即制得口服后产生新型冠状病毒抗体的菌株。

进一步的改进，所述步骤四中，将pCMV-COVID-19-S转化到菌株SD1231内，然后在加有浓度为12.5μg/mL的氨苄青霉素的LB液体培养基培养并筛选出pCMV-COVID-19-S转化到菌株SD1231内的阳性菌株。

进一步的改进，所述pCMV-COVID-19-S购自南京金斯瑞生物科技有限公司。

附图说明

图1为P1+P2的PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图。

图2为WISTA大鼠口服疫苗SVD1231-19-S后的血清抗体胶体金检测结果图。

具体实施方式