[发明专利]一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法

权利要求书

1.一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

I.样品采集，清洗后用戊二醛和锇酸双重固定；

II.醋酸铀块染色；

III.丙酮脱水后环氧树脂梯度渗透，再将样品纯树脂聚合；

IV.超薄切片、染色后透射电镜检测。

2.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤I中，所述样品采集为：收集1-2×10⁷个细胞样本。

3.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤I中，所述清洗具体方法为：用1×PBS清洗3-5遍。

4.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤I中，所述双重固定具体方法为：5%戊二醛固定8-12小时，再进行1%锇酸固定0.5-1小时。

5.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤II中，所述醋酸铀块染色，在2-8℃冰箱放置2-3小时，减少样本的晃动。

6.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤III中，所述丙酮脱水具体方法为：用70%丙酮、90%丙酮、100%丙酮各脱水5分钟，脱水时放置在摇床上震荡。

7.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤III中，所述环氧树脂梯度渗透具体方法为：丙酮：环氧树脂=1:1渗透20分钟后纯树脂渗透2小时，渗透时放置在摇床上震荡。

8.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤III中，所述将样品纯树脂聚合具体方法为：样品在纯树脂60℃聚合处理，不少于10小时。

9.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤IV中，所述超薄切片为70-100nm，铜网承载。

10.根据权利要求1所述的一种快速的细胞超薄切片电镜检测逆转录病毒的方法，其特征在于，在步骤IV中，所述染色具体方法为：柠檬酸铅片染色，常温下染色10-15分钟。