[发明专利]抗柯萨奇A6型病毒的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是柯萨奇A6型病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及针对柯萨奇A6型病毒的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体或其抗原结合片段的用途。本发明的抗体或其抗原结合片段可用于诊断、预防和/或治疗柯萨奇A6型病毒的感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，手口足病)。

技术领域

本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是柯萨奇A6型病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及柯萨奇A6型病毒的单克隆抗体，以及包含所述抗体的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体的用途。本发明的抗体可用于诊断、预防和/或治疗柯萨奇A6型病毒的感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，手口足病)。

背景技术

手足口病(Hand,Foot,and Mouth Disease，简称HFMD)作为我国丙类传染病之一，首发表现为发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡的症状，部分患者会发展成为无菌性的脑炎、脑膜炎等重症表现。目前，全球大部分地区均有手足口病例的相关报道，而亚太地区作为手足口病的高发地区，近年来对于手足口病给与了足够的重视。导致HFMD疫情的肠道病毒有20多种，目前的研究显示，除了肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇A16型病毒(CVA16)，柯萨奇A6型病毒(CVA6)也已发展成为HFMD的主要病原体。近年来在新加坡、芬兰、法国、日本等国家或地区发生了CVA6暴发流行。研究显示，CVA6感染可引起疱疹性咽峡炎、偶发性脑膜炎等症状，也可引发非典型的HFMD临床症状，可产生较严重的全身性水疱疹或大疱疹，还可引起侵蚀性的皮疹、湿疹、紫癜损伤和指甲脱落，部分可导致致死性的脑膜炎、脑炎和心肌炎，具有较严重的危害性。因此，根据获得的HFMD流行病学和病原学调查数据，目前普遍认为，CVA6应与EV71和CVA16一样作为优先的HFMD疫苗预防对象，亟需研制有效的预防和治疗方法。

CVA6是小RNA病毒科肠道病毒属的成员，直径27～30nm，无包膜病毒，呈二十面体结构。CVA6为单股正链RNA病毒，基因组全长约7400bp，包含一个开放阅读框，编码多聚蛋白前体，蛋白前体被自身产生的水解酶切割为结构蛋白P1和非结构蛋白P2和P3。结构蛋白P1主要编码由VP1、VP0和VP3组成的衣壳蛋白，VP0在病毒成熟过程中水解为VP2和VP4，其中VP4位于衣壳蛋白内部，VP1、VP2和VP3分布在衣壳病毒的表面，组成五聚体。开放阅读框编码区两侧分别是5’和3’非编码区，5’非编码区约由740个核苷酸组成，与病毒基因组的复制和翻译功能相关，3’非编码区包含Poly A尾，对于病毒的成功感染是必不可少的。

病毒颗粒的类型和结构特征与其抗原性和免疫原性存在密切联系。目前认为，肠道病毒在其组装和感染过程中存在多种不同的颗粒类型，不同型别的肠道病毒可能具有特别的颗粒类型分布特征与结构特征，进而具有不同的疫苗应用潜能。因此，进一步开展对CVA6病毒颗粒抗原检测方面的研究是十分必要的。目前还没有关于CVA6病毒颗粒抗原检测方法的报道。获得可特异结合CVA6病毒颗粒的单克隆抗体并建立CVA6颗粒抗原相关检测方法，对CVA6疫苗的研发及质控具有非常重要的意义。

发明内容

申请人经过了深入的研究和创造性的劳动，例如利用不同时间、不同地点分离到的不同的CVA6代表株免疫小鼠，获得30余株杂交瘤细胞株，其均能够产生对CVA6有特异性反应的单克隆抗体。申请人通过蔗糖密度梯度离心纯化方法获得CVA6病毒颗粒，进一步利用ELISA方法分别检测上述CVA6单克隆抗体与CVA6病毒颗粒的反应性，筛选与CVA6病毒颗粒具有高结合活性的单克隆抗体。最终获得3株可高效、特异性结合CVA6病毒颗粒单克隆抗体，以及能够分泌该抗体的单克隆细胞系，并进一步建立了基于该抗体的特异性检测CVA6病毒颗粒的检测方法，以及证明该单克隆抗体具有制备抗CVA6药物或疫苗的潜力。

由此提供了下述发明。

本发明的抗体