[发明专利]一种基于RGO-CS-Hemin/Au NPs纳米复合材料检测GPC3的方法

权利要求书

1.一种基于RGO-CS-Hemin /Au NPs纳米复合材料检测GPC3的方法，按以下步骤进行：

步骤1：RGO-CS-Hemin材料的制备

还原性氧化石墨烯的制备：

氧化石墨烯倒入蒸馏水中，使用超声细胞破碎仪超声，使其充分溶解均匀，制成GO水溶液；取制备好的GO水溶液置于烧杯中，加入抗坏血酸使其还原GO，得RGO；

还原性氧化石墨烯-血红素的制备：

将Hemin用氨水溶解，并用蒸馏水稀释，得到Hemin溶液；将RGO与Hemin混合，将水合肼加入到RGO和Hemin混合液进行还原，水浴反应后，离心得RGO-Hemin复合物；

还原性氧化石墨烯-壳聚糖-血红素复合材料的制备：

将壳聚糖用乙酸溶解，得到CS溶液；取CS溶液加入到RGO-Hemin复合物中，以EDC/NHS活化，离心分离得RGO-CS-Hemin悬浊；

步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建

将丝网印刷电极置于H₂SO₄溶液中，进行循环伏安扫描，得到活化后的丝网印刷电极，用水冲洗干净；

将活化后的丝网印刷电极置入氯金酸溶液中，进行恒电位沉积，沉积结束后用水将电极冲洗干净，得到Au NPs/SPE电极；

将Au NPs/SPE电极用戊二醛浸泡，用PBS洗涤，吹干，而后滴加RGO-CS-Hemin悬浊液孵育，PBS洗涤，晾干，得到RGO-CS-Hemin/Au NPs/SPE电极；

取氨基化的GPC3适配体滴加到传感器界面，孵育一段时间，用PBS溶液洗涤未固定的GPC3适配体，滴加牛血清蛋白溶液进行封闭，得到GPC3 aptamer /RGO-CS-Hemin/Au NPs/SPE传感界面，晾干备用；

步骤3：GPC3的标准曲线绘制

将标准GPC3溶液滴加到步骤2得到的GPC3 aptamer /RGO-CS-Hemin/Au NPs/SPCE传感界面，孵育一段时间，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；

将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；

分别对不同浓度的GPC3进行检测，绘制标准曲线，计算出该方法的最低检测限；

步骤4：实际血清样品中GPC3的检测

在步骤2得到的GPC3 aptamer /RGO-CS-Hemin/Au NPs/SPE传感界面，滴加待测实际血清样品，孵育一段时间，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；

将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；

根据步骤3所述标准曲线，计算得到所述待测实际血清样品中GPC3的浓度。

2.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤1中所述水合肼的质量分数为80%，用量为8 μL。

3.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤1中所述乙酸溶液为1%。

4.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤1中所述EDC/NHS浓度为10mmol/L。

5.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤2中所述将电极置于0.5mol/L H₂SO₄中进行循环伏安扫描20段，电压范围为-0.4V -1.2V。

6.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤2中所述用于纳米金的沉积溶液为4 mL 0.01%的氯金酸，沉积电压为-0.5 V，沉积时间120 s。

7.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤2中所述BSA溶液为6μL 0.5%的BSA溶液。

8.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述电极的孵育温度为25°C，孵育时间为20分钟。

9.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述DPV扫描所用的溶液为pH值为6.0的PBS溶液，扫描范围为0.2V- 1.2V，扫描速率为0.01V/s。