[发明专利]同时靶向CD19和CD20的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了编码同时靶向CD19和CD20的嵌合抗原受体的核酸分子，所述嵌合抗原受体包含胞外区、跨膜区和胞内信号转导区，其编码的所述胞外区包含CD19和CD20结合结构域，其中，所述CD19和CD20结合结构域中的CD20结合结构域为如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。通过实验证明该嵌合抗原受体修饰的T细胞对CD19⁺、CD20⁺和CD19⁺/CD20⁺B细胞淋巴瘤细胞和B细胞淋巴细胞白血病细胞有很强的杀伤作用，对不表达CD19和CD20的细胞几乎无杀伤作用，有效防止了脱靶效应。本发明嵌合抗原受体可用于CD19⁺B细胞和CD20⁺B细胞血液肿瘤的治疗，以及与CD19 CAR‑T细胞或CD20 CAR‑T细胞的联合治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及同时靶向CD19和CD20的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞作为一种免疫治疗策略，在肿瘤治疗中受到广泛的重视和应用。CAR的结构一般由胞外靶向连接区(常为具有抗原识别功能的单链抗体)，铰链区，跨膜区和胞内信号转导区四部分组成。目前根据胞内信号转导区加入共刺激分子的数量，将CAR分为一代(无共刺激分子)、二代(含一种共刺激分子)和三代(含两种共刺激分子)。目前应用最多的是二代CAR。

CAR-T细胞免疫治疗的应用使复发难治性急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblastic leukemia,ALL)的治疗取得了重大的突破，特别是靶向CD19的CAR-T细胞治疗在ALL患者中取得了显著的临床功效。然而，CAR-T治疗缺乏CAR靶向抗原的白血病细胞有很大的复发风险。多项试验也报告了由于CD19阴性白血病细胞的出现而导致患者复发。同时，CD19 CAR-T治疗淋巴瘤的效果一般。CD19和CD20表达于除浆细胞外的发育分化各阶段的B细胞的表面。抗CD20单克隆抗体是多种B细胞恶性肿瘤的有效治疗方案。虽然利妥昔单抗联合化疗在CD20阳性B细胞淋巴瘤患者中取得了良好的疗效，但对利妥昔单抗的获得性耐药已经成为一个问题，其机制可能是肿瘤细胞表面降低了CD20的表达。在这种情况下，具有CD19和CD20结合域的双特异性CAR旨在识别只有一个同源抗原的白血病细胞。抗CD19和CD20双特异性CAR-T细胞可能通过识别抗原丢失的白血病细胞而降低复发的风险。

因此，为了解决CD19 CAR-T技术对于淋巴瘤的治疗效果一般，并且治疗期间因逃避机制等而产生复发或无效的问题，需要寻找一种新的嵌合抗原受体。

发明内容

本发明的一个方面，是针对现有技术中CD19 CAR-T技术对于淋巴瘤的治疗效果一般，并且治疗期间因逃避机制等而产生复发或无效，提供了一种同时靶向CD20和CD19的双靶点嵌合抗原受体及其应用。

本发明提供的技术方案为：

编码同时靶向CD19和CD20的嵌合抗原受体的核酸分子，所述嵌合抗原受体包含胞外区、跨膜区和胞内信号转导区，其编码的所述胞外区包含CD19和CD20结合结构域，其中，所述CD19和CD20结合结构域中的CD20结合结构域为如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

在本发明的技术方案中，任意合适的能够特异性结合CD19的结合结构域与SEQ IDNO.2所示的CD20结合结构域形成双特异性结合结构域后，都能够实现本发明的目的。作为优选，本发明所述的CD19结合结构域的序列为SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列，可以根据其序列按照常规方法制得，例如但不限于，化学合成的方法。本发明所述CD20结合结构域是对现有技术中CD20结合结构域的特殊改造，目的是为了提高其功能效果。