[发明专利]一种犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法

说明书

本发明公开了一种犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法，包括如下步骤：步骤100：制备20nm胶体金溶液：步骤200：胶体金标记；步骤300：对膜材进行处理；步骤400：对T，C线进行包被；步骤500：将成品进行包装。本发明犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法，在制备的胶体金上标记，对样品垫进行烘干，用划膜仪将CPV单抗9E7和羊抗鼠包被，将制作好的金标垫压在NC膜上1mm贴在PVC板上，配制样品稀释液分装于稀释液管内,每管稀释液与试剂盒一起组成一份检测试剂，最终制备了犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒，能够对犬细小病毒进行快速的检测，检测成本低。

技术领域

本发明涉及试剂盒制备技术领域，具体为一种犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法。

背景技术

犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)是细小病毒属成员，单链小DNA病毒。病毒粒子为等轴对称的二十面体，外观呈圆形或六边形，无囊膜，病毒颗粒直径为21nm～24nm，沉降系数为23S～27S。在1977年，首次从患有肠炎的病犬体内分离获得CPV，病犬以呕吐、出血性肠炎、白细胞减少为主要特征，幼犬的易感性高，可引起幼犬的心肌炎；为了与犬极小病毒(MCV)相区别而命名为CPV-2，随后在许多国家和地区的犬科动物中相继被发现，发病率为50％～100％，死亡率为0％～50％，对养犬业和经济动物养殖业危害极大，并且也影响到了野生动物的生存，因此要建立快速有效的检测方法，并针对该病进行有效治疗。

我国已建立的用于检测CPV抗体的血清学方法有血凝试验、血凝抑制试验、琼脂扩散试验等，但是由于CPV与猫泛白细胞减少症病毒、水貂肠炎病毒三者之间能发生交叉血清学反应，因此在实际应用中这些方法常受到限制。酶联免疫吸附试验(ELISA)可检测CPV抗原，也可检测CPV抗体；PCR检测敏感性高，特异性强，可分辨野毒感染和疫苗免疫，但这两种技术都需要特殊的仪器设备，检测成本高，检测速度慢。

发明内容

本发明的目的在于提供一种犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法，在制备的胶体金上标记，对样品垫进行烘干，用划膜仪将CPV单抗9E7和羊抗鼠包被，将制作好的金标垫压在NC膜上1mm贴在PVC板上，配制样品稀释液分装于稀释液管内,每管稀释液与试剂盒一起组成一份检测试剂，最终制备了犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒，能够对犬细小病毒进行快速的检测，检测成本低，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种犬细小病毒胶体金快速检测试剂盒的制作方法，包括如下步骤：

步骤100：制备20nm胶体金溶液；

步骤200：胶体金标记；

步骤300：对膜材进行处理；

步骤400：对T，C线进行包被；

步骤500：将成品进行包装。

进一步地，步骤100包括如下步骤：

步骤101：取洁净的250ml三角烧瓶1个，加入100ml浓度为0.01％的氯金酸双蒸水溶液,加热煮沸，迅速加入1％柠檬酸三钠溶液继续煮沸8分钟，自然冷却至室温，蒸发的水量用双蒸水不足；

步骤102：透射电镜鉴定胶体金颗粒呈圆形大小均一无聚集为合格，置棕色玻璃瓶密闭避光保存。

进一步地，步骤200包括如下步骤：

步骤201：CPV单抗3G8透析除盐；

步骤202：在100ml胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾溶液调PH至7.40，搅拌均匀，边加边搅拌，逐滴加入除盐后的CPV单抗3G8 1.4mg，加完继续搅拌5分钟后静置15分钟；