[发明专利]基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法与应用

权利要求书

1.一种基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述荧光传感器包括蓝色荧光的碳化硅量子点和红色荧光的金纳米簇，所述碳化硅量子点和金纳米簇在365nm激发下具有440nm和660nm的两个发射峰值；

所述制备方法，包括以下步骤：

（1）碳化硅量子点的制备：称取碳化硅粉末加入到蒸馏水中，用氨水调节pH为9-12，混合搅匀，将以上混合物放入到聚四氟乙烯反应釜，加热反应8-13h后透析过滤，即可得到纯化的碳化硅量子点；

（2）金纳米簇的制备：将氯金酸溶液添加到牛血清蛋白溶液中，在36-38°C下进行磁性搅拌，然后加入氢氧化钠溶液将pH值调整到11-13，并在36-38°C加热12-16h后，取上清液用微孔膜进行过滤，即得金纳米簇；

（3）抗菌肽与纳米探针的结合：将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺添加到碳化硅量子点溶液中，以激活在碳化硅量子点表面呈现的羧基基团，激活的碳化硅量子点与-NH₂改性抗菌肽1经共价键连接，将形成的混合物在室温下在黑暗中搅拌0.5-2h，然后将混合物取出用透析袋进行透析，得到SiC-AMP1；将抗菌肽2加入到AuNCs溶液中，带有-SH末端的抗菌肽2溶液与AuNCs通过Au-S键作用结合到一起，得到的复合物样品为Au-AMP2；

（4）双发射荧光传感器SiC/Au NPs的自组装：将步骤（3）制备的SiC-AMP1与Au-AMP2溶液在室温下混合后，缓慢搅拌，然后离心，收集沉淀物，用去离子水洗涤，即获得双发射SiC/Au NPs荧光探针，于4℃保存待用。

2.根据权利要求1所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述氯金酸溶液浓度为5-10 mM，牛血清蛋白浓度为50-150 mg/mL，氢氧化钠溶液浓度为1M-5M。

3.根据权利要求1所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中-NH₂改性抗菌肽1以及带有-SH末端的抗菌肽2溶液的浓度为0.1-1mg/mL。

4.根据权利要求1所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）的SiC-AMP1与Au-AMP2溶液混合体积比为3:7-7:3。

5.一种根据权利要求1所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的制备方法制得的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的应用，其特征在于，所述双发射SiC/Au NPs荧光传感器在检测口腔细菌及其在法医唾液鉴定中的应用。

6.根据权利要求5所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的应用，其特征在于，用于检测口腔细菌的方法包括以下步骤：

S1：标准溶液中口腔细菌的检测：配置不同浓度的口腔细菌溶液，将其加入到双发射SiC/Au NPs荧光探针溶液中，反应0.1-6h分别测量其波长在440nm和660nm处的荧光强度，绘制两种细菌浓度与荧光强度的线性关系，制得标准溶液曲线，从而实现标准溶液中口腔细菌的检测；

S2：唾液样本中口腔细菌的检测：制备唾液样品，唾液样品中添加不同浓度的口腔细菌，每个样品分别进行3个平行试验，向双发射SiC/Au NPs荧光探针中加入人体唾液样品，反应0.1-6h后测量其波长在440nm和660nm处的荧光强度，通过反应前后的荧光强度对比，建立用于两种细菌检测的标准工作曲线，从而实现唾液样本中口腔细菌的同步检测。

7.根据权利要求6所述的基于细菌同步检测的双发射SiC/Au NPs荧光传感器的应用，其特征在于，用于法医唾液鉴定的方法为：收集法医实际案例中的唾液、血液、尿液、阴道液样本，进行预处理后，通过双发射SiC/Au NPs荧光探针对不同体液样本中口腔特异细菌定性定量检测，当两种口腔细菌被同时检测，即唾液样本呈现阳性结果，从而能够从众多法医体液样本中鉴别出唾液。