[发明专利]一种过表达vault RNA 2-1基因质粒构建方法及其应用有效
| 申请号： | 202010260686.3 | 申请日： | 2020-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN111593069B | 公开（公告）日： | 2022-11-08 |
| 发明（设计）人： | 马祥雪 | 申请（专利权）人： | 中国中医科学院西苑医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京金恒联合知识产权代理事务所 11324 | 代理人： | 李强 |
| 地址： | 100091*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 vault rna 基因 质粒 构建 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达vtrna2-1基因的质粒在制备用于抑制结肠癌细胞Caco-2细胞增殖的药物上的用途，其中所述质粒的目的序列的脱氧核苷酸序列为：
CGGGTCGGAGTTAGCTCAAGCGGTTACCTCCTCATGCCGGACTTTCTATCTGTCCATCTCTGTGCTGGGGTTCGAGACCCGCGGGTGCTTACTGACCCTTTTATGCAA，
其特征在于所述质粒的构建方法包括：
A）通过RT-PCR合成人的vtrna2-1基因片段；
B）将vtrna2-1基因片段与TA克隆载体连接，将重组质粒转化到DH5α感受态细胞，通过克隆PCR鉴定并筛选阳性克隆，提取阳性克隆质粒，利用限制性内切酶进行酶切，酶切位点分别为HindIII和XhoI，
C）将上述酶切产物与真核质粒载体pcDNA3.1(+)连接，并将连接产物转化到DH5α感受态细胞，通过克隆PCR进行鉴定，鉴定并筛选阳性克隆，抽提质粒，获得真核重组质粒pcDNA3.1(+)- vtrna2-1，
D）利用限制性内切酶酶切图谱鉴定所建真核重组质粒pcDNA3.1(+)- vtrna2-1。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述质粒由vtrna2-1基因片段与真核表达质粒重组构建。
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