[发明专利]一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法

说明书

本发明涉及一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法，属于分析化学领域。所述方法中，以多糖衍生物为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。本发明的方法简单、快速、准确。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法。

背景技术

德谷胰岛素(Insulin degludec)是由NovoNordisk公司研发，于2012年10月在日本上市，批准治疗1、2型糖尿病。2015年9月25日，美国FDA批准丹麦诺和诺德公司的新药德谷胰岛素(Insulin Degludec)注射剂上市，商品名为Tresiba。德谷胰岛素为新一代基础胰岛素类似物，通过经皮下注射后形成多六聚体，从而发挥24h超长效作用。德谷胰岛素的CAS号为844439-96-9，分子量为6103.97204，德谷胰岛素的分子式为C₂₇₄H₄₁₁N₆₅O₈₁S₆。

德谷胰岛素侧链，化学名称为(S)-16-((1-羧基-4-((2,5-二酮基吡咯-1-基)氧基)-4-酮基丁基)氨基)-16-羰基十六烷基羧酸，CAS号为943586-12-7，是德谷胰岛素合成过程中重要的起始物料，其引入的对映异构体杂质，化学名称为(R)-16-((1-羧基-4-((2,5-二酮基吡咯-1-基)氧基)-4-酮基丁基)氨基)-16-羰基十六烷基羧酸，会对德谷胰岛素的质量产生重要的影响，故需要对其进行严格的质量控制。

目前《美国药典》USP、《欧洲药典》EP、《日本药典》JP及《中国药典》Ch.P.均没有收载德谷胰岛素侧链及其对映异构体的分离检测方法，为了更好更准确地控制产品中的杂质，保证原料药的质量，需要研究适合于德谷胰岛素侧链及其对映异构体的分析方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用手性色谱柱分离检测德谷胰岛素侧链与其对映异构体的方法，从而实现德谷胰岛素侧链与其对映异构体的分离和测定。本发明的方法能够有效分离德谷胰岛素侧链与其对映异构体杂质，方法的专属性好，灵敏度高，准确度可靠，可用于德谷胰岛素的质量控制。

一种用液相色谱法分离检测德谷胰岛素侧链与其对映异构体的方法，其特征在于，包括：采用多糖衍生物为填料的手性色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。

在一些实施例中，所述手性色谱柱的多糖衍生物填料为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]或纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)或其组合。在某些实施例中，多糖衍生物填料为纤维素-(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。

在一些实施例中，所述手性色谱柱可选自CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H和CHIRALPAK IE。在一些实施例中，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK IE，销售厂家是大赛璐药物手性技术(上海)有限公司，英文名DAICEL CHIRAL TECHNOLOGIES(CHINA)CO.,LTD。在一些实施例中，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK IE。

在一些实施例中，B相中所述的混合溶液中，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85：15至95:5。在一些实施例中，B相中乙醇与甲醇的体积比(V/V)为88：12至92：8。在某些实施例中，B相中乙醇与甲醇的体积比(V/V)为90：10。

在一些实施例中，B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100。在一些实施例中，B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3:100。