[发明专利]卵巢滤泡膜干细胞及其分离方法、培养方法和应用

权利要求书

1.一种卵巢滤泡膜干细胞的分离方法，其特征在于，包括以下制备方法：

获取卵巢组织：选择年龄为4~10岁的雌性食蟹猴，获取卵巢组织皮质部，剥离卵巢组织周围脂肪，保留卵巢皮质基质，清洗，将卵巢皮质基质剪成组织碎块；

培养：向组织碎块中加入培养液，离心，离心转速为1400~1600rpm ，离心时间为4~6min，保留沉淀，加入培养液重悬，在37±0.5℃、5±0.5% CO₂下孵育时间为20~30h，离心，离心转速为1400~1600rpm，离心时间为4~6min，保留沉淀，加入培养液重悬，得到细胞悬液，接种培养，即得卵巢滤泡膜干细胞；所述培养步骤中的培养液DMEM-F12为基底液，包括以下浓度的成分：1nM地塞米松、1ng/ml LIF、50ng/ml 胰岛素、50ng/ml 转铁蛋白、50pg/ml亚硒酸钠、20ng/ml 抑瘤素M、1%V/V非必需氨基酸、1%V/V N2、2% V/V B27无血清添加剂、20ng/ml bFGF、20ng/ml EGF、20ng/ml PDGF-BB、0.1mM β-巯基乙醇。

2.一种卵巢滤泡膜干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

向由权利要求1所述分离方法得到的卵巢滤泡膜干细胞中加入培养液进行传代培养，所述培养液以DMEM-F12为基底液，包括以下浓度的成分：1nM地塞米松、1ng/ml LIF、50ng/ml 胰岛素、50ng/ml 转铁蛋白、50pg/ml亚硒酸钠、20ng/ml 抑瘤素M、1%V/V非必需氨基酸、1%V/V N2、2% V/V B27无血清添加剂、20ng/ml bFGF、20ng/ml EGF、20ng/ml PDGF-BB、0.1mM β-巯基乙醇。

3.一种卵巢滤泡膜干细胞的分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

向由权利要求1所述分离方法得到的卵巢滤泡膜干细胞中加入诱导培养基进行分化培养，所述诱导培养基以DMEM-F12为基底液，包括以下浓度的成分：2%V/V FCS、1nM T3、1ng/ml LH、70ng/ml IGF-1、10ng/ml PDGF-BB、50ng/ml 胰岛素、50ng/ml 转铁蛋白、50pg/ml亚硒酸钠。