[发明专利]一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明通过对SVV/FJ/001株进行基因缺失突变改造，同时在SVA cDNA中融合进O型口蹄疫病毒的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的外源FMDV VP1基因，且表达产物具有良好的反应原性；制备得到的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，该疫苗株显著提高了生物安全性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用。

背景技术

塞内卡病毒A(SenecavirusA,SVA)，也称塞内卡病毒(Senecavirus)、塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)，属于小RNA病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)，也是该属的唯一成员。该病毒感染猪能够引起猪的原发性水泡病，与口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎等引起的临床症状难以区分。SVA感染后能引起断奶仔猪、保育、育肥和繁殖的各年龄段的猪发生水泡性病变，同时伴随跛行、发热、厌食、嗜睡等临床症状，新生仔猪除了上述症状外，还可能存在持续的腹泻、脱水等症状，甚至会突然死亡。

口蹄疫病毒(Foot andMouth DiseaseVirus,FMDV)属于微RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)的单股正链RNA病毒，包括A、O、C、Asial、SAT1、SAT2、SAT3七个血清型，型间无交叉保护。病毒基因组全长约8.5kb，由5’端非编码区、ORF区和3’端非编码区组成。编码区编码一个多聚蛋白，经病毒自身蛋白酶和宿主细胞蛋白酶作用逐级降解，形成多种中间体和成熟的4种结构蛋白(VP4、VP2、VP3、VP1)和8种非结构蛋白(L^pro、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D)。其中，VP1作为结构蛋白基因编码所得的最重要的衣壳蛋白，是决定FMDV抗原性、诱导机体产生中和抗体和激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白，且在小RNA病毒科中，VP1被公认为是免疫原性最强的蛋白，因此，作为FMDV的抗原基因，表达VP1蛋白，保持其生物学活性与免疫原性，在FMDV基因工程疫苗的研究方面有重要作用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡病毒重组核酸、包含所述重组核酸的塞内卡重组病毒、由所述重组核酸编码的塞内卡重组病毒、包含所述塞内卡重组病毒的塞内卡重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明通过对SVV/FJ/001株进行基因缺失突变改造，同时在SVAcDNA中融合进O型口蹄疫病毒的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的外源FMDV VP1基因，且表达产物具有良好的反应原性；制备得到的疫苗株抗原产能高、致病性显著降低甚至对猪无致病性；灭活疫苗免疫动物不仅能产生SVA的免疫活性，且能产生针对融合基因的免疫活性。该疫苗株显著提高了生物安全性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种塞内卡病毒重组核酸，所述重组核酸的序列包括对塞内卡病毒株的5'UTR基因序列进行缺失突变改造，同时在塞内卡病毒cDNA的SphⅠ和NotⅠ酶切位点之间插入O型口蹄疫病毒的VP1基因。

优选的，对塞内卡病毒株的5'UTR基因序列进行缺失突变改造后的5'UTR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；插入的O型口蹄疫病毒的VP1基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

优选的，所述塞内卡病毒株包括SVV/FJ/001株。

本发明还提供了所述重组核酸在制备重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡病毒重组核酸或塞内卡重组疫苗株中的应用。