[发明专利]一种高耐镉菌株及其分离筛选方法

说明书

本发明涉及土壤修复技术领域，具体是公开了一种高耐镉菌株及其分离筛选方法，所述菌株于2018年05月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：60378，其26S rDNA序列是序列表SEQ NO.1所示。本发明克服了现有技术的不足，由重金属污染的土壤中分离出高耐镉菌株，其耐受镉的性能相对于现有的文献报道更佳，并且本发明中高耐镉菌株的分离筛选方法对仪器要求低，操作简单，安全快捷。本发明的高耐镉菌株对受重金属污染的土壤和水体修复具有重要的意义，具备重大的社会和经济价值。

技术领域

本发明涉及土壤修复技术领域，具体属于一种高耐镉菌株及其分离筛选方法。

背景技术

我国部分地区土壤环境污染较为严重，土壤污染通常以某一种污染物为主，并同时存在着其他污染物，即复合污染问题。据报道，目前我国受 Cd、As、Cr、Pb等重金属污染的耕地面积近2500万hm，约占总耕地面积的1/5。其中镉污染为主的镉-铅复合污染严重危害了我国湖南等主要粮食产地的粮食产量和质量安全，因此，土壤镉污染己成为一个重要的环境问题，对人体健康和国家粮食安全造成严重威胁。同时，水体重金属污染也日趋严重，某些流域中污染物镉的超标率高达64％。

生物修复被认为是一种来源广泛、处理费用低、无污染且修复效率高的方法，特别是微生物修复技术越来越受到学者的青睐。

修复重金属污染的微生物主要是土著真菌和细菌，不同微生物对重金属污染的耐性也不同，通常为真菌细菌放线菌。污染土壤中的土著微生物往往具有较高的重金属抗性，从中分离的微生物由于适应当地的自然环境，所以能有效修复重金属污染。但是目前还没有报道有很好重金属抗性的菌株，所以寻找一种高重金属抗性的菌株，就对土壤和水体修复和环境保护具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供了一种高耐镉菌株及其分离筛选方法，克服了现有技术的不足，在受污染的土壤中分离纯化出一种高耐镉的菌株。

为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：

一种高耐镉菌株，所述菌株于2018年05月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：60378，其26S rDNA 序列是序列表SEQ NO.1所示。

进一步，所述菌株在固体培养基中最大耐受镉的浓度为22000mg/L，液体培养基中最大耐受镉的浓度为18000mg/L。

一种高耐镉菌株的分离筛选方法，包括以下具体步骤：

(1)菌株的分离纯化，选取多种重金属污染土壤样品制成土壤悬液，取上清液均匀涂布到含100mg/L氯化镉的固体纯化培养基分别挑取单个菌落，采用平板划线分离法将菌落分别种到镉浓度为100、150、200mg/L的固体培养基中将耐镉能力最强的菌落选出，对其单菌落连续4次采用平板划线分离法进行纯化；

(2)高耐镉菌株的筛选，将纯化所得菌株依次接种到含镉浓度分别为 250-24000mg/L的系列浓度梯度的同种筛选培养基上，室温下进行培养，挑选出抗高浓度镉的菌株，得到本发明的高耐镉菌株，其编号为QN-3。

进一步，所述土壤悬液的具体制备步骤为：将土壤样品与无菌水按照 1:10的重量比进行混合，在室温条件下150r/min振荡30min后静置10min。

进一步，所述固体纯化培养基包括以下组分：葡萄糖15g，酵母提取物 5g，选矿黑药2g，选矿黄药4g，七水硫酸镁3mL，硫酸铵2mL，氯化钾4mL，硫酸锰0.3g，琼脂20g，溴酚蓝6mL。