[发明专利]一种高速逆流色谱法纯化醋酸奥曲肽的方法

说明书

本发明公开了一种高速逆流色谱法纯化醋酸奥曲肽的方法，以PEG1000‑硫酸铵饱和溶液‑水按一定比例组成的双水相系统或乙醇‑乙腈‑异丙醇‑硫酸铵饱和溶液‑水按一定比例组成的双水相系统为高速逆流色谱纯化体系。通过高速逆流色谱法一步实现奥曲肽的纯化，并通过MCI填料转盐。由于整个纯化过程中没有使用价格高昂的高压纯化系统和色谱填料，该方法纯化醋酸奥曲肽成本低廉；整个纯化过程中无样品死吸附，纯化收率高；高速逆流色谱法产生的废液仅为反相纯化方法的1/3，环保压力小，减轻后处理难度。

技术领域

本发明属于纯化方法技术领域，具体涉及一种高速逆流色谱法纯化醋酸奥曲肽的方法。

背景技术

醋酸奥曲肽是一种与天然内源性生长抑素具有类似作用的单环寡肽，具有抑制从垂体前叶分泌促甲状腺激素和抑制胃、肠、胰的多肽分泌等生理作用。肽序中两个d型氨基酸的引入使得其药效作用强而持久。1988年在瑞士首次上市至今，临床上广泛的应用于治疗食道—胃静脉曲张出血、预防胰腺术后的并发症、胃肠胰内分泌肿瘤及肢端肥大症。

化学结构式如下：

来源于固相合成的奥曲肽粗肽纯度通常在50％-80％，已申请专利的奥曲肽纯化工艺多以反相色谱为纯化手段。作为耗材，反相色谱填料价格是比较高昂的，通常每公斤填料的价格在万元以上；使用大型进口亦或国产的高压纯化系统，价格更是高达百万元/套；生产中使用大量有机溶剂，产生的工业污水环境污染严重、回收处理难度大、成本高。譬如有专利(CN108794578A)通过两步反相纯化获得合格产品。其两个步骤使用了C8和C18两种色谱填料，其生产成本不言而喻。此外，该工艺产生大量含有异丙醇、乙腈的废液，环境污染严重，其回收利用成本高技术难度大。再如有专利(CN102965291A)以苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填料，乙腈和三氟乙酸水溶液为流动相体系实现纯化目的。在纯化过程中，同样产生大量的有机溶剂废水，污染较大。尽管共聚物填料较C18反相填料价格低，但其价格仍然高达每公斤数千元。对于企业自身来说，降低生产成本提高生产效率是提升利润的有效途径。现有多肽纯化方法基本采用反相色谱方法，用常规的反相纯化途径，在生产设备、色谱填料、高纯流动相上的投入大大降低了产品利润。再者，从环保节能的角度来看，产生的废弃填料和废水回收利用困难、治理成本高。

高速逆流色谱法(HSCCC)是一种液-液分配色谱法，其具有样品回收率高、分离效率快、产生的液体废弃物少等特点。更为重要的是，该方法无需价格高昂的色谱填料，设备成本也较反相纯化系统便宜的多。本专利正是以双水相系统高速逆流色谱法一步实现产品纯化目的。

发明内容

为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种醋酸奥曲肽的纯化方法。本发明主要是通过高速逆流色谱法一步实现奥曲肽的纯化，并通过MCI填料转盐。整个制备过程无须使用价格高昂的高压纯化设备、反相色谱填料，降低生产成本；与此同时，高速逆流色谱法产生更少的废液，是一种更为环保的纯化方法。

高速逆流色谱是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。

高速逆流色谱在天然产物分离中已经得到了较为广泛的应用。诸如生物碱、黄酮、萜类等大量纯化案例证明这是一种非常高效的分离办法。相较之下，多肽的极性较大亲水性强。因此在常用的正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水、乙酸乙酯/甲醇/水、乙酸乙酯/正丁醇/水体系中，多肽通常只分布在水层(下层)而几乎不分布在有机层(上层)，难以获得理想的K(分配系数，0.5-2.0较为适宜)。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种高速逆流色谱法纯化醋酸奥曲肽的方法，以PEG1000-硫酸铵饱和溶液-水按一定比例组成的双水相体系或乙醇-乙腈-异丙醇-硫酸铵饱和溶液-水按一定比例组成的双水相体系为高速逆流色谱纯化体系。