[发明专利]一种构建生产柠檬醛的重组菌的方法及由其构建的重组菌及其应用

权利要求书

1. 一种生产柠檬醛的方法，所述方法包括将用于生产柠檬醛的重组菌接种到LB发酵培养基中，接种4小时后，添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导发酵生产柠檬醛，其中，IPTG终浓度为200μM， OD600为1.0，发酵时间为40小时，

其中，所述用于生产柠檬醛的重组菌通过以下方法构建：

1) 构建用于生成异戊二烯焦磷酸（IPP）和二甲基烯丙基焦磷酸（DMAPP）的表达载体，用以依次表达乙酰乙酰CoA硫解酶、3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶、3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶、MVA激酶、磷酸MVA激酶、MVA焦磷酸脱羧酶以及IPP异构酶；

2) 构建包含GPPS编码基因、GES编码基因、geoA编码基因和idi编码基因的表达载体，用以表达香叶酯二磷酸合成酶、香叶醇合成酶、香叶醇氧化酶以及IPP异构酶，

所述包含GPPS编码基因、GES编码基因、geoA编码基因和idi编码基因的表达载体包含表达GPPS-GES-geoA-idi的基因盒序列，所述基因盒依次包括六个部分： sp2启动子，绝缘子RiboJ，带有核糖体结合序列的GPPS编码序列，带有rbs1的GES序列，带有rbs2的geoA序列，以及带有rbs3的idi序列，并且

所述包含GPPS编码基因、GES编码基因、geoA编码基因和idi编码基因的表达载体的序列为SEQ ID NO:13；

3) 将步骤1) 构建的表达载体和步骤2)中构建的表达载体共转入大肠杆菌BW25113中，得到重组菌，

其中，所述用于生成IPP和DMAPP的表达载体包括合成IPP和DMAPP的各个酶的编码序列：编码乙酰乙酰CoA硫解酶的基因atoB、编码3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶的基因HMGS、编码3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶的基因HMGR、编码MVA激酶的基因MK、编码磷酸MVA激酶的基因PMK、编码MVA焦磷酸脱羧酶的基因PMD和编码IPP异构酶的基因idi，

其中，atoB的序列为SEQ ID NO:1，HMGS的序列为SEQ ID NO:2，HMGR的序列为SEQ IDNO:3，MK的序列为SEQ ID NO:4，PMK的序列为SEQ ID NO:5，PMD的序列为SEQ ID NO:6，以及idi的序列为SEQ ID NO:7，并且atoB、HMGS、HMGR共用一套调控元件，受序列为SEQ ID NO:31的lac UV5启动子调控，MK、PMK、PMD和idi共用一套调控元件，受序列为SEQ ID NO:32的pTac启动子调控。