[发明专利]一种膀胱癌体液活检生物标志物及其应用

说明书

本发明公开了一组辅助诊断膀胱癌的体液生物标志物，该生物标志物为SNP位点rs1485891776、rs3764324和/或rs1488782245。本发明通过SNP基因型诊断试剂和诊断试剂盒的研制和应用，可使得膀胱癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础。

技术领域

本发明专利涉及到一种癌症标志物，具体的涉及膀胱癌体液活检生物标志物及其应用。

背景技术

膀胱癌是全球发病第9位的常见恶性肿瘤，发病率仅次于肺癌，在死亡方面位居第13位。膀胱癌的大多数组织学类型为尿路上皮癌，可分为非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)或肌层浸润性膀胱癌(MIBC)。约75％的新诊断患者为NMIBC，复发率高，5年生存率达90％，MIBC患者5年生存率为50％且50％发生转移，5年生存率仅为5％。目前临床上对于高级别浸润性膀胱癌无理想疗法，可用的方法包括根治性膀胱切除术和化疗，但预后差。膀胱癌诊断的金标准是膀胱镜检查及组织病理活检，但膀胱镜检查为创伤性检查，对患者伤害较大，易引起疼痛、血尿等并发症，花费多，也难以实现肿瘤的早期诊断和疗效的实时监控，因此其临床应用有限。一般通过组织病理活检发现膀胱肿瘤基因异常，但由于肿瘤的异质性，部分组织活检或许不能代表侵袭性最强的亚群。尿细胞学检查是检测膀胱癌的非侵入性方法，为临床常用的诊断方法，但其存在主观性较强、对于恶性程度低的肿瘤不够敏感并且依赖于操作等缺点。以上方法均有自己的局限性，因此寻找膀胱癌的特异检测标志物迫在眉睫。

近年来，随着对液体活检的研究不断深入，为肿瘤的研究提供了一个新的方向，发现液体活检在肿瘤研究中有重要意义，液体活检采取癌症患者体液(尤其是血液或尿液)来检测其中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)、循环游离DNA(cfDNA)(包括循环肿瘤DNA，ctDNA)及外泌体等特异性肿瘤标志物并对癌症做出早期诊断，因其可实时监控肿瘤患者疾病状况而迅速成为临床关注的焦点，具有无创、易重复等优点，能检测出与肿瘤靶向治疗或治疗抵抗有关的基因改变，可动态评估特定分子标志物，未来液体活检在肿瘤的制定个体化治疗方案、监测疗效、判断预后等方面具有潜在的应用前景。而且血标本和尿标本是无创的，相对容易获得，使得此项研究更具有临床应用价值。

CTCs最早是在1869年由Ashwort提出，现在CTCs普遍定义为从实体瘤或者转移灶脱落因自行脱落或者诊疗操作而进入患者外周血的肿瘤细胞，也称为肿瘤微小转移灶或者循环上皮细胞。小部分进入外周血不被机体的免疫系统识别并且清除的CTCs能够通过黏附和聚集形成极小的癌栓，侵出血管透过基底膜，在远处器官形成转移灶。恶性肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因，越来越多的分子生物学和临床研究结果表明，肿瘤转移很可能在肿瘤发生的早期就已经出现。目前肿瘤的发现和诊断临床上仍依赖于影像学检查及传统肿瘤标志的监测，难以早期发现肿瘤的转移或复发，也难以及时反映疗效。近年来许多研究结果证实，存在于外周血中的CTCs在肿瘤转移过程中发挥着重要作用，其检测技术的出现，对早期发现肿瘤微转移、评估预后和疗效以及肿瘤的个体化治疗具有重要意义。有研究显示，上皮来源的恶性消化系肿瘤，如胰腺癌、结肠癌、肝癌和胃癌等患者的外周血中都可以检测到CTCs，并且CTCs的数量、形态和动态变化能够反映肿瘤的进展和治疗效果。

循环游离DNA(cfDNA)，也叫游离DNA，是指循环血浆或血清、脑脊液、滑膜液中，游离于细胞外的DNA片段。含量非常稀少，常为双链，片段较短，大约在160-180bp之间，来源于正常或者肿瘤细胞。其中来自肿瘤患者的肿瘤细胞由于非程序性死亡而释放的DNA，为循环肿瘤DNA(ctDNA)。一般认为，凋亡和坏死的肿瘤细胞通常被巨唾细胞或其他清道夫细胞吞噬，吞噬了肿瘤细胞的巨噬细胞可以主动地释放消化了的DNA。多种肿瘤患者ctDNA含量高于健康人，研究表明，一个携带100g肿瘤，约相当于3×1010个肿瘤细胞的患者，每天约有高达3.3％的肿瘤细胞释放入外周血。可见，定量检测ctDNA为指标来反映肿瘤的存在和严重。通过对肿瘤患者ctDNA的定量检测及特征性的基因检测为临床肿瘤的早期诊断、预后监测及跟踪随访等提供一系列方便、快捷、敏感、特异、微创的分子生物学检测手段。