[发明专利]一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法，包括以下步骤：步骤1：向菲律宾蛤仔组织加入液氮研磨成粉状；步骤2：加入DNA提取液继续研磨，转入离心管60℃水浴加热0.5‑1h，离心获取上清液；步骤3：将上清液去除多糖和RNA后，用体积分数为70％无水乙醇沉淀DNA，直至出现丝状DNA；步骤4：将丝状DNA吸出，并用体积分数为75％的无水乙醇冲洗2‑3次，真空干燥后，用TE缓冲液重悬。本发明还公开了菲律宾蛤仔DNA的提取用的试剂盒，利用该试剂盒和提取方法提取DNA的效率高，用量少，并且操作简便，容易实施，还能减少大量有毒化学试剂的使用，减少对实验人员的身体损害。

技术领域

本发明涉及蛤仔提取领域，特别是涉及一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法及试剂盒。

背景技术

菲律宾蛤仔是贝类海产品，隶属海洋无脊椎动物中的软体动物门，双壳纲，帘蛤目，帘蛤科。菲律宾蛤仔广泛分布于我国南北海区，它生长迅速，养殖周期短，适应性强(广温、广盐、广分布)，离水存活时间长，是一种适合于人工高密度养殖的优良贝类，是中国四大养殖贝类之一。是西太平洋亚热带到低寒温带的一个品种，并分布在欧洲的温带地区。野生种群在菲律宾、中国南海和东海、黄海、日本海、鄂霍茨克海以及南千岛群岛周围。它的养殖最早始于这些地区通过采集野生蛤苗所进行的传统捕捞活动。

目前，野生资源比较紧缺，大多是人工养殖，而由于菲律宾蛤仔有类胡萝卜素、脂类、多糖、蛋白质、氨基酸、聚醚、无机化合物以及其它多种生物活性成分，具有抗肿瘤、抗凝血、保护心脑血管、解有机磷中毒、抗菌和抗病毒等多种生物活性。市场上有些不法分子常用一些外形相似的蛤蜊冒充菲律宾蛤仔。很多种类的蛤蜊并不能简单通过外形进行有效的鉴别，而现有技术中也有采用提取DNA分子鉴别的方法进行，但是常规DNA提取时采用试剂盒法和SDS法，而试剂盒法需要样品量比较大，SDS法流程复杂，耗费时间，效率低。因此，急需一种简便、快速且高效率的提取DNA的方法，以满足市场对于菲律宾蛤仔品种鉴定的需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种菲律宾蛤仔DNA提取方法，该方法不用大量的有毒化学试剂，并且过程简单，提取效率高。

本发明还提供一种菲律宾蛤仔DNA提取用的试剂盒，该试剂盒方法用少量的DNA样品就能快速的对菲律宾蛤仔DNA进行扩增。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法，包括以下步骤：

步骤1：向菲律宾蛤仔组织中加入液氮研磨成粉状；

步骤2：加入DNA提取液继续研磨，转入离心管60℃水浴加热0.5-1h，离心获取上清液；

步骤3：将上清液去除多糖和RNA后，用体积分数为70％无水乙醇沉淀DNA，直至出现丝状DNA；

步骤4：将丝状DNA吸出，并用体积分数为75％的无水乙醇冲洗2-3次，真空干燥后，用TE缓冲液重悬。

优选的是，步骤1中所述菲律宾蛤仔组织为性腺。

优选的是，所述DNA提取液包含以下组分：Tris的浓度为10mmol/L，pH＝8.0；NaCl的浓度为50mmol/L；EDTA的浓度为1mmol/L；SDS的浓度为2g/L；蛋白酶K的浓度为0.1g/L。

优选的是，用NaCl溶液去除多糖，所述NaCl溶液等体积添加到所述上清液，所述NaCl溶液的浓度为5-8mol/L。

优选的是，还包括以下步骤：加入NaCl溶液后，在5000-6000rpm条件下离心15-20min，去沉淀收集上清液。

优选的是，去除多糖后收集的上清液中加入LiCl溶液，所述LiCl溶液等体积添加到去除多糖后收集的上清液中，所述LiCl溶液为5-8mol/L；