[发明专利]一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法及试剂盒

权利要求书

1.一种菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：向菲律宾蛤仔组织中加入液氮研磨成粉状；

步骤2：加入DNA提取液继续研磨，转入离心管60℃水浴加热0.5-1h，离心获取上清液；

步骤3：将上清液去除多糖和RNA后，用体积分数为70％无水乙醇沉淀DNA，直至出现丝状DNA；

步骤4：将丝状DNA吸出，并用体积分数为75％的无水乙醇冲洗2-3次，真空干燥后，用TE缓冲液重悬。

2.如权利要求1所述的菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，步骤1中所述菲律宾蛤仔组织为性腺。

3.如权利要求1所述的菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，所述DNA提取液包含以下组分：Tris的浓度为10mmol/L，pH＝8.0；NaCl的浓度为50mmol/L；EDTA的浓度为1mmol/L；SDS的浓度为2g/L；蛋白酶K的浓度为0.1g/L。

4.如权利要求1所述的菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，用NaCl溶液去除多糖，所述NaCl溶液等体积添加到所述上清液，所述NaCl溶液的浓度为5-8mol/L。

5.如权利要求4所述的菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，还包括以下步骤：加入NaCl溶液后，在5000-6000rpm条件下离心15-20min，去沉淀收集上清液。

6.如权利要求4所述的菲律宾蛤仔DNA的提取方法，其特征在于，去除多糖后收集的上清液中加入LiCl溶液，所述LiCl溶液等体积添加到去除多糖后收集的上清液中，所述LiCl溶液为5-8mol/L；

加入所述LiCl溶液后，在5000-6000rpm条件下离心15-20min，去沉淀收集上清液。

7.一种菲律宾蛤仔DNA的提取用的试剂盒，其特征在于，包括：DNA提取液、沉淀液、冲洗液；

所述DNA提取液包含以下组分：Tris的浓度为10mmol/L，pH＝8.0；NaCl的浓度为50mmol/L；EDTA的浓度为1mmol/L；SDS的浓度为2g/L；蛋白酶K的浓度为0.1g/L；

所述沉淀液为体积分数70％的无水乙醇；

所述冲洗液为体积分数75％的无水乙醇。

8.如权利要求7所述的菲律宾蛤仔DNA的提取用的试剂盒，其特征在于，还包括随机引物，所述随机引物浓度为5ng/mL。

9.如权利要求8所述的菲律宾蛤仔DNA的提取用的试剂盒，其特征在于，所述随机引物进行RADP扩增体系包括：5ng/mL随机引物1μL、10mmoL/L dNTP 2μL、5×Taq酶Buffer 10μL、RNA抑制剂0.5μL、模板DNA2.5μL，水9μL；

反应条件为：(95℃30s；56℃10s；72℃20s)，30个循环；72℃1min；4℃恒温。