[发明专利]一种GPC-3抗体包被磁珠及其制备方法、试剂盒

说明书

本发明具体涉及一种GPC‑3抗体包被磁珠及其制备方法、试剂盒，属于生物技术领域，该方法包括：将GPC‑3抗体配制为质量浓度为8‑12mg/mL的溶液，获得GPC‑3抗体溶液；将粒径为1.5‑2.0um与2.0‑3.0um的磁性微球按质量比1：3‑1：5混合，获得磁珠溶液；将第一缓冲液与所述磁珠溶液混合，获得第一混合溶液；将所述GPC‑3抗体溶液与所述第一混合溶液按混合，并回旋振荡15‑30min，获得第二混合溶液；将碳二亚胺配制为质量浓度为5‑20mg/mL的溶液，获得碳二亚胺溶液；将所述第二混合溶液与所述碳二亚胺溶液混合，并回旋振荡1‑2h，获得第三混合溶液；将封闭液与所述三混合溶液混合，并回旋振荡15‑30min，获得第四混合溶液；将所述第四混合溶液进行离心处理，离心处理后去除上清液，获得GPC‑3抗体包被磁珠。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体为一种GPC-3抗体包被磁珠及其制备方法、试剂盒。

背景技术

Glypican-3(GPC-3)是Glypican家族中的一员，属于膜性硫酸乙酰肝素多糖蛋白。在哺乳动物的胚胎期，GPC-3通过影响多个分子信号通路而对组织器官的发育起到重要的调控作用，其功能缺失将导致过度生长和畸变综合征(SGBS)。成人GPC-3的异常表达与多种肿瘤的发生发展关系密切。GPC-3在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中表达上调，与HCC的生物学特性相关，在肝癌的早期诊断、生物治疗和预后评估中具有良好的应用前景。

肝细胞癌简称肝癌，是全球最常见的恶性肿瘤之一。根据世界卫生组织报告显示，我国肝癌的发病率为25.7/10万，居全球之首，每年新发和死亡患者占全球总数的一半。尽管HCC的治疗水平有了极大提高，但死亡率并无明显改善，5年以上生存率仅为10％左右，其主要原因是肝癌起病隐匿，早期没有症状或症状不明显，又缺乏有效的早期诊断手段，患者就诊时通常已经达到晚期，失去了最佳治疗的机会。因此，早期发现癌变并有效治疗是提高HCC生存期的关键。

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)及其异质体是目前临床上诊断HCC重要指标和特异性较强的肿瘤标志物，然而在多项研究及实践工作中均发现，AFP在一些良性肝病、生殖性畸胎瘤、肺癌、妊娠活动期等患者中也可出现升高，临床上大概有30％～40％的HCC患者AFP为阴性，所以存在一定的误诊率和漏诊率。2010版美国肝病研究学会指南已不再将AFP作为筛查指标。

研究表明约80％的HCC特异地表达GPC-3，肝癌组织中GPC-3阳性患者，其血液中同样可检测到GPC-3，这是由于GPC-3易受细胞的蛋白转换酶水解作用，形成游离sGPC-3进入循环系统。因此，血清中sGPC-3水平间接反映着成人机体内GPC-3阳性肝癌细胞数量水平；约有83％HCC患者血清可检测到高水平GPC-3，而肝硬化患者血清GPC-3阳性率仅为9.38％且呈低水平。这些研究结果提示血清sGPC-3含量将可能作为早期筛查、诊断HCC的依据，并以此监测患者的预后状况。我国，约30％的HCC患者血清AFP为阴性，研究发现GPC-3在血清AFP阴性HCC患者中却有很高检出率。GPC-3对于诊断HCC有较高的特异性，在一定程度上可以弥补AFP的特异性不足，因此，联合检测可显著提高HCC检出率。

虽然GPC-3有明确的临床诊断价值，但是目前GPC-3的检测多依赖传统的酶联免疫检测分析方法，该方法对人工依赖程度较高，人为影响因素对检测结果的准确定、特异性以及批间差影响较大，因此需要开发基于自动化的检测的反应体系，以满足临床检测的需求，一方面可以保证检测结果的准确性和重现性，另一方面可以降低对技术人员的依赖。此外，专利申请文件CN105759051A一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒及其制备方法，公开了一种检测GPC-3的试剂盒，但是该试剂盒以双氧水作为反映底物，双氧水本身的稳定性相对较差，对检测结果有一定的不良影响，因此，需要开发一种自动、快速、准确的GPC-3检测试剂盒来满足检测需求。

发明内容