[发明专利]一种GPC-3抗体包被磁珠及其制备方法、试剂盒

权利要求书

1.一种GPC-3抗体包被磁珠的制备方法，其特征在于，包括：

将GPC-3抗体配制为质量浓度为8-12mg/mL的溶液，获得GPC-3抗体溶液；

将粒径为1.5-2.0um与2.0-3.0um的磁性微球按质量比1：3-1：5混合，获得磁珠溶液；

将第一缓冲液与所述磁珠溶液按体积比1：1-1:2混合，获得第一混合溶液；

将所述GPC-3抗体溶液与所述第一混合溶液按体积比1:2-1:3混合，并回旋振荡15-30min，获得第二混合溶液；

将所述活化剂与所述第二混合溶液按体积比1：3-1:4混合，并回旋振荡1-2h，获得第三混合溶液；

将封闭液与所述第三混合溶液按体积比1：4-1:5混合，并回旋振荡15-30min，获得第四混合溶液；

将所述第四混合溶液进行离心处理，离心处理后去除上清液，获得GPC-3抗体包被磁珠。

2.根据权利要求1所述的一种GPC-3抗体包被磁珠的制备方法，其特征在于，所述第一缓冲液包括如下一种：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、醇醚磺基琥珀酸单酯二钠盐MES缓冲溶液、磷酸盐缓冲液、Tris–盐酸缓冲液，优选地，所述封闭液包括如下至少一种：PEG20000、BSA、酪蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种GPC-3抗体包被磁珠的制备方法，其特征在于，所述活化剂为质量浓度5-20mg/mL的碳二亚胺溶液EDAC。

4.根据权利要求1所述的一种GPC-3抗体包被磁珠的制备方法，其特征在于，所述将所述第四混合溶液进行离心处理，离心处理后去除上清液，获得GPC-3抗体包被磁珠，包括：

将所述第四混合溶液在转速为12000-16000rpm条件下离心处理10-30min，离心处理后去除上清液；

用第二缓冲液重悬去除上清液后的第四混合溶液；

重复所述离心处理和所述重悬2-3次，以去除GPC-3抗体包被磁珠中的杂质，获得GPC-3抗体包被磁珠。

5.一种GPC-3抗体包被磁珠，其特征在于，由如权利要求1-4任一项所述的一种GPC-3抗体包被磁珠的制备方法制备得到。

6.一种GPC-3抗体包被磁珠试剂盒，其特征在于，包括如权利要求5所述的一种GPC-3抗体包被磁珠，其中，将所述GPC-3抗体包被磁珠与防凝液混合，以减少磁珠凝集。

7.根据权利要求6所述的一种GPC-3抗体包被磁珠试剂盒，其特征在于，还包括碱性磷酸酶标记GPC-3抗体、化学发光底物溶液和洗涤剂。

8.根据权利要求7所述的一种GPC-3抗体包被磁珠试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记GPC-3抗体的制备方法如下：

将摩尔浓度为10-100mmol/L的3-吗啉丙磺酸,摩尔浓度为1-5mmol/L的乙二胺四乙酸和pH值为6.5-7.5的缓冲液混合，获得第一稀释液；

将GPC-3抗体通过所述第一稀释液稀释至质量浓度为1-2mg/mL，并加入10-50uL且摩尔浓度为100-500mmol/L的2-MEA，于25-30℃反应30-60min或者于3-5℃反应1-2h后，进行脱盐处理，获得脱盐GPC-3抗体；

将摩尔浓度为10-100mmol/L的3-吗啉丙磺酸,摩尔浓度为1-5mmol/L的乙二胺四乙酸和pH值为7.5-8.5缓冲液混合，获得第二稀释液；

将碱性磷酸酶通过所述第二稀释液稀释至质量浓度为2-5mg/mL，并加入10-30uL且摩尔浓度为100-250mmol/L的SM(PEG)6，于25-30℃反应30-60min或者于3-5℃反应1-2h后，进行脱盐处理，获得脱盐碱性磷酸酶；

将所述脱盐GPC-3抗体和所述脱盐碱性磷酸酶以体积比1:1或者2:1混合，于25-30℃反应30-60min或者于3-5℃反应1-2h，获得碱性磷酸酶标记GPC-3抗体。