[发明专利]一株可产高活力褐藻胶裂解酶的勒克氏菌及其应用

说明书

本发明公开了一种可产高活力褐藻胶裂解酶的勒克氏菌及其应用，其中，该株勒克氏菌（Leclercia sp.）是从取自黄海的腐烂的海带中分离得到的，其能够产高活力的褐藻胶裂解酶，该菌株已于2019年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.M 2019313。本发明的有益之处在于：（1）筛选得到的勒克氏菌可产高活力褐藻胶裂解酶，高活力褐藻胶裂解酶对底物海藻混悬液的转化率高，在制备褐藻寡糖时，有利于提高生产效率；（2）利用勒克氏菌制备褐藻寡糖时，由于该菌株可产高活力褐藻胶裂解酶，所以生产成本低、生产效率高。

技术领域

本发明涉及一株勒克氏菌及其应用，具体涉及一株可产高活力褐藻胶裂解酶的勒克氏菌及其应用，属于海洋生物技术领域。

背景技术

我国海带产量占国际总产量87%，但高产量并未获得高经济效益。褐藻酸是从褐藻中提取的一种酸性多糖，褐藻酸盐是甘露糖醛酸和古罗糖醛酸组成的线性多糖。利用褐藻资源可开发褐藻酸等相关多功能生物制品，常用于食品和医疗材料领域，但是它的高粘度和高聚合度限制了其应用。褐藻酸盐可经物理降解、化学降解、酶解等方法获得褐藻寡糖。褐藻寡糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、促进植物生长等生物活性，因此可广泛应用于食品、医药、农业及化妆品等领域。

通过目前的研究可知，采用物理降解法和化学降解法来制备褐藻寡糖时，易破坏褐藻寡糖的结构，从而影响褐藻寡糖的生物活性。酶解法制备褐藻寡糖因具有专一性强、条件温和、可控性强等优势，所以采用酶解法制备褐藻寡糖更具有研究意义。褐藻胶裂解酶存在于多种生物体中，经过β-消除后，产生不饱和寡糖。目前，分离纯化得到的菌株有芽孢杆菌属、海洋弧菌属、海洋嗜盐单胞菌等，但这些微生物所产的褐藻胶裂解酶的活力普遍较低，一般在0.3-2U/mL，并且有许多菌株还是致病菌，因而限制了这类微生物的广泛应用。因此，需要分离筛选得到产高活力褐藻胶裂解酶并且能广泛应用的菌株。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一株可产高活力褐藻胶裂解酶并且是非致病菌的勒克氏菌。

本发明的第二个目的在于提供一种该勒克氏菌的应用，具体提供的是利用该勒克氏菌制备褐藻寡糖的方法。

为了实现上述第一个目标，本发明采用如下的技术方案：

一株勒克氏菌，分类命名为 Leclercia sp.，其特征在于，该菌株是从取自黄海的腐烂的海带中分离得到的，其能够产高活力的褐藻胶裂解酶，该菌株已于2019年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No. M 2019313。

为了实现上述第二个目标，本发明采用如下的技术方案：

利用前述保藏编号为CCTCC No. M 2019313的勒克氏菌制备褐藻寡糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将菌株在选择性固体培养基上进行活化；

步骤2：取活化后的菌种数环，转接到种子培养基中，30℃、200-260rpm培养24h，得到种子液；

步骤3：按2-5%的接种量将种子液接入到发酵培养基中，30℃、200-260rpm培养33h，得到发酵液；

步骤4：将发酵液加入到海藻混悬液中，40℃水浴中酶解24-48h，然后升温至120℃，灭活1h，得初解溶液；

步骤5：将初解溶液依次进行膜过滤、浓缩、冷冻干燥，制得褐藻寡糖。

前述的方法，其特征在于，在步骤1中，所用到的选择性固体培养基是以海藻酸钠为唯一碳源的，其配方为：

海藻酸钠5g/L，硫酸铵5g/L，硫酸镁1g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸亚铁0.01g/L，琼脂20g/L，自来水配制。