[发明专利]用于大肠菌群快速显示检测的培养基、制备方法及应用

说明书

本发明属于微生物培养技术领域，公开了一种用于大肠菌群快速显示检测的培养基、制备方法及应用，所述用于大肠菌群快速显示检测的培养基由酵母粉5～10g，胰化蛋白胨5～15g，乳糖5～15g，氯化钠5～10g，溴甲酚紫0.01～0.04g，噻唑蓝0.0001～0.1g组成，并用水补足至1000ml。所述大肠菌群检测试剂盒、检测纸片均包含肠道菌群快速培养并显色的培养基。所述用于大肠菌群快速显示检测的检测方法应用大肠菌群检测试剂盒、检测纸片进行实现。本发明提供的用于大肠菌群快速显示检测的检测方法选择性高、检测周期短、成本低、可操作性强、操作简单、耗时少并且敏感性高，适用于快速、简便、高效地进行大肠菌群的分离与鉴别。

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，尤其涉及一种用于大肠菌群快速显示检测的培养基、制备方法及应用。

背景技术

目前，最接近的现有技术：大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群主要包括肠杆菌科中大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧，不形成芽孢；在35～37℃条件下，48小时内能发酵乳糖声酸产气，革兰氏阴性。大肠菌群中以大肠埃希氏菌属为主，大肠埃希氏菌属俗称为典型大肠杆菌。大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。本群中典型大肠杆菌以外的菌属，除直接来自粪便外，也可能来自典型大肠杆菌排出体外7～30天后在环境中的变异。所以食品中检出大肠菌群表示食品受动人或温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。

用于检测大肠菌群的方法有很多，主要依靠常规的细菌学培养方法、免疫学方法、核酸探针技术等。细菌学培养方法需经富集培养、选择性分离、形态特征观察、生理生化反应、血清学鉴定等过程，一般需4到7天，操作繁琐、费时耗力并且敏感性低、特异性差，且无法检测受损菌及死菌；免疫学方法易污染，且交叉反应比较严重、假阳性多、灵敏度偏低；核酸探针检测技术的最大优点是特异性强，但探针检测技术中也存在一定的问题，如灵敏度不够高；检测一种菌就需制备一种探针。

纸片法也是大肠菌群快速检测常用的方法。纸片法是以大肠菌群细菌生长发育时分解乳糖产酸，同时产生脱氢酶脱氢，氢与无色氯化三苯四氮唑(TTC)作用形成不溶性的红色化合物(三苯基甲腙，TTF)使菌落(菌苔)变红的原理，将一定量的乳糖、指示剂(TTC、酸碱指示剂)、蛋白胨等吸附在特定面积的无菌滤纸上。大肠菌群通过上述2种指示剂显示出发酵乳糖产酸，纸片变黄和形成红色斑点(红晕)的固有特性。以此特性作为阳性结果的唯一判定标准。但是在含有辣椒的食品、调味品等样品的检测中，因其含有的红色辣椒微粒与显红色的大肠菌群菌落极其相似，使判别出现假阳性，严重干扰计数结果。

因此，本领域需要一种高效、快速、低廉、准确、操作简便的方法，对大肠菌群进行检测的方法。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)细菌学培养方法需经富集培养、选择性分离、形态特征观察、生理生化反应、血清学鉴定等过程，一般需4到7天，操作繁琐、费时耗力并且敏感性低、特异性差，且无法检测受损菌及死菌。

(2)免疫学方法易污染，且交叉反应比较严重、假阳性多、灵敏度偏低。

(3)核酸探针检测技术灵敏度不够高；检测一种菌就需制备一种探针。

(4)纸片法可以实现大肠菌群的快速检测，但无法排除含辣椒食品、调味品等样品中红色辣椒微粒对结果判定的影响。