[发明专利]一种利用大肠杆菌降解黄原胶制备黄原胶寡糖的方法

权利要求书

1.一种利用大肠杆菌降解黄原胶制备黄原胶寡糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养大肠杆菌，得到大肠杆菌菌液；

(2)将步骤(1)所得菌液离心后弃上清，沉淀用水和缓冲液清洗后，溶于缓冲液中，再经高压匀浆破碎后离心，保留上清液，即为大肠杆菌胞内蛋白液；

(3)将所得大肠杆菌胞内蛋白液冷冻干燥，得大肠杆菌胞内蛋白粉；

(4)将黄原胶溶于缓冲液中，得溶液1，所述溶液1中黄原胶的浓度为2-10mg/ml；再将大肠杆菌胞内蛋白粉溶于溶液1中，得溶液2，所述溶液2中大肠杆菌胞内蛋白粉的浓度为0.5-2.5mg/ml；反应一段时间后，将反应液煮沸后离心，留上清液，所得上清液即为黄原胶寡糖；

所述步骤(2)中的缓冲液为20mM PB pH6.0缓冲液；

所述步骤(4)中的缓冲液为20mM PB缓冲液，缓冲液的pH为6.0-8.0；离心的转速为10000g，离心时间为10min；

所述步骤(4)中反应一段时间为0.5-2.5min，反应温度为30-50℃，反应液煮沸20min后离心。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中培养大肠杆菌的方法包括如下步骤：

(1)将-80℃冻存的大肠杆菌于LB pH7.0的无抗性固态平板上划线培养，在37℃培养箱中培养12h；

(2)挑取单菌落于37℃ 200rpm摇床中培养16h得到种子液；

(3)将种子液接种到液态LB pH7.0培养基中，在37℃ 200rpm摇床中培养1.5h培养，其中种子液和培养基的体积比例为1:50，之后放入到16℃ 200rpm摇床中培养20h，得大肠杆菌菌液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中将步骤(1)所得菌液离心的转速为8000rpm，时间为5min；经高压匀浆破碎后离心的转速为10000g，时间为10min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中冷冻干燥所用时间为3d。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌选自HB101菌株、TOP10菌株、JM109菌株、BL21(DE3)菌株、DH5a菌株或DH10B菌株。