[发明专利]合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法及其菌株

权利要求书

1.一种能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，以解脂耶氏酵母菌株Yarrowia lipolytica CGMCC 7326为底盘微生物，通过代谢工程或基因工程手段，构建以葡萄糖、甘油、淀粉中的一种或几种为碳源发酵高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的方法；

所述代谢工程或基因工程手段包括在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中表达以下基因：

(1)编码己糖激酶的基因；

(2)编码转酮酶的基因；

(3)编码转醛酶的基因；

(4)编码4-磷酸-赤藓糖磷酸化酶的基因；

其中，合成的含己糖激酶的表达框序列为SEQ ID No.24，含转酮酶基因的表达框序列为SEQ ID No.25，含转醛酶基因的表达框序列为SEQ ID No.26，含4-磷酸-赤藓糖磷酸化酶基因的表达框序列为SEQ ID No.27。

2.如权利要求1所述的能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中敲除其自身的以下基因中的一种或一种以上：

(1)6-磷酸葡萄糖异构酶基因；

(2)甘露醇脱氢酶基因；

(3)阿拉伯糖醇脱氢酶基因；

(4)赤藓糖醇脱氢酶基因。

3.一种如权利要求1或2所述的构建方法构建得到的能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株。

4.一株能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株，其特征在于，所述菌株为解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)ery949-4Δ，保藏编号为CGMCC No.19351。

5.一种利用如权利要求3或4所述的能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成赤藓糖醇的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、将所述重组解脂耶氏酵母菌株培养于含碳源、氮源、无机盐以及水的培养基中，在起始pH值3.0～7.0，温度25～35℃条件下振荡或者搅拌发酵培养，发酵结束后菌液分离得到含赤藓糖醇的发酵液以及酵母细胞；

S2、从所述含赤藓糖醇的发酵液以及酵母细胞中分离纯化得到赤藓糖醇。

6.如权利要求5所述的利用能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成赤藓糖醇的方法，其特征在于：

步骤S1中，所述培养基中的碳源为葡萄糖、果糖、甘油中的一种或几种混合，所述培养基中碳源含量为50～350克/升；所述培养基中的氮源为蛋白胨、酵母粉、酵母浸膏、玉米浆干粉、磷酸氢二铵、柠檬酸铵中的一种或几种的混合，一般用量5～30克/升；所述培养基中的无机盐为硫酸镁、氯化锰、氯化铜、氯化锌中的一种或一种以上。

7.如权利要求5所述的能高效合成赤藓糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成赤藓糖醇的方法，其特征在于，

步骤S2中，所述分离纯化包括：菌液分离得到澄清含赤藓糖醇的发酵液、浓缩得到富含赤藓糖醇浓缩液、一次结晶得到赤藓糖醇粗制品、粗制品重溶、离子交换去除离子、脱色、浓缩、二次结晶得到赤藓糖醇精制品、干燥。