[发明专利]线粒体环状RNA作为肝细胞癌生物标志物中的应用

说明书

本发明提供两种线粒体环状RNA(mitochondria‑encoded circRNA，缩写为mecciRNA)作为肝细胞癌生物标志物中的应用。所述肝细胞癌生物标志物选自线粒体编码的环状RNA：mecciND1，mecciND5，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2所示，两者均在肝细胞癌组织中显著高表达。本发明制备了筛查上述两种mecciRNA的引物，可用于检测来自怀疑患有肝细胞癌的受试者的疑似病灶和病灶旁组织样品中的mecciND1，mecciND5，从而用于肝细胞癌的鉴定或病理分析。mecciND1和mecciND5的检测引物可用于制备相关试剂盒，用于肝细胞癌的临床辅助诊断。

技术领域

本发明属于肿瘤标志物医学技术领域，涉及天然核酸的新用途，尤其涉及mecciND1和mecciND5作为肝细胞癌相关的RNA生物标志物及其应用。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，是全球第三大致死性癌症。亚洲和非洲是世界上发病率最高的国家，仅我国就占亚洲和非洲病例的一半。由于缺乏及早发现和及时治疗，5年生存率低于20％(McGlynn KA等人，2011；Lee S S等人，2012)。

癌症生物标志物的发现为癌症的早期诊断和治疗提供了可能的解决方法。大多数癌症患者被检测出时多是处于癌症晚期阶段，这主要是由于临床诊断缺少敏感的和特异性的生物标志物。RNA生物标记作为一种新兴的生物标记物，具有高灵敏性和特异性的优势(Xi X等人，2017)。大量研究表明，异常的mRNA和非编码RNA在癌症等疾病的发生和发展中起着重要的作用。环状RNA(circRNA)，是一类特殊的非编码RNA，这类RNA的5’端和3’端共价连接在一起，形成一个闭合环状的结构。具有存在广泛、结构稳定、组织特异性高等特点，并在基因表达调控中发挥重要作用。circRNA在肿瘤组织细胞中会出现明显的表达异常现象，这些特征使其在作为新的临床诊断标记物的开发和应用上面更具有优势。

发明内容

目前本领域研究的circRNA大多来源于细胞核。本发明通过对癌症细胞的线粒体RNA进行高通量测序，以及通过生物信息学分析以及实验验证，筛选到一类新型的环状RNA，由线粒体基因组编码产生，为线粒体环状RNA，命名为mecciRNA。通过实时定量PCR检测到两个在肝细胞癌组织样品中显著高表达mecciRNA，分别命名为mecciND1，mecciND5。其中，mecciND1长116bp，位于线粒体的chrM染色体上，ND1 mRNA之内；而mecciND5长154bp，位于线粒体的chrM染色体上，ND5 mRNA之内。

因此，本发明的目的是提供两种线粒体环状RNA(mecciRNA)作为肝细胞癌生物标志物，这两种mecciRNA分别为mecciND1和mecciND5，针对肝细胞癌均具有较高的灵敏度。

本发明的另一个目的是提供特异性扩增mecciND1和mecciND5的引物。

具体地，在一个方面，本发明提供肝细胞癌生物标志物，其为线粒体环状RNA，mecciND1，所述mecciND1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在一个方面，本发明提供检测上述肝细胞癌生物标志物的试剂在用于制备肝细胞癌诊断产品中的用途。

在一个实施方案中，所述产品选自制剂、芯片或试剂盒。

在一个实施方案中，所述肝细胞癌为人来源的。

在一个实施方案中，所述试剂包括特异性扩增所述mecciND1的引物对。在一个实施方案中，所述引物对包括：

如SEQ ID NO.3所示的正向引物序列；和

如SEQ ID NO.4所示的反向引物序列。