[发明专利]一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种叶酸‑氨基己酸‑血蓝蛋白偶联物及其制备方法，制备方法包括如下：1)使氨基己酸与血蓝蛋白在1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺存在下、在水中反应，透析分离，获得含有氨基己酸‑血蓝蛋白偶联物的上清液；2)将溶解在碳酸盐缓冲液中的叶酸以及分别溶解在有机溶剂中的N‑羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺混合反应，获得反应混合液，再加入上清液中，室温搅拌过夜，制得；本发明方法能够快速高效且高质量(活性好)的制得新型免疫原叶酸‑氨基己酸‑血蓝蛋白偶联物，耗时短，且目的偶联物收率高，纯度高，用其制备的抗体尤其是单克隆抗体对于叶酸检测而言灵敏度高、特异性好。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及可作免疫原的叶酸偶联物，具体涉及一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物(FA-ACA-KLH)及其制备方法。

背景技术

叶酸(Folate)是1941年由米切尔(H.K.Mitchell)从菠菜中提取纯化的，其是一种水溶性维生素，因绿叶中含量十分丰富而得名，又名喋酰谷氨酸。在自然界中有几种存在形式，其母体化合物是由喋啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸3种成分结合而成，其分子式为C₁₉H₁₉N₇O₆，化学结构式如下所示：

叶酸作为机体细胞生长和繁殖必不可少的维生素之一，缺乏会对人体正常的生理活动产生影响。许多文献报道，缺乏叶酸与神经管畸形、巨幼细胞贫血、唇腭裂、抑郁症、肿瘤等疾病有直接关系。

神经管畸形：神经管畸形(NTDs)是胚胎在发育过程中神经管闭合不全而引起的一组缺陷，包括无脑儿、脑膨出、脊柱裂等，是最常见的新生儿缺陷疾病之一。世界范围内NTDs发病率约为千分之零点五至千分之二。我国是NTDs的高发国家，每年有较多的NTDs患儿出生，NTDs给家庭和社会带来沉重的压力和负担。

NTDs的发病主要由基因与环境的相互作用导致。1991年，英国医学研究委员会才首次证实了妊娠前后补充叶酸可预防NTDs的发生，降低50-70％的发病率。叶酸对NTDs的预防作用已被认为是20世纪后期最令人激动的医学发现之一。1995，我国卫生局提倡新婚和准备生育的妇女服用叶酸增补剂，使“九五”期间我国NTDs的发生率下降50％。2000年，中国营养协会建议育龄妇女毎日膳食中叶酸的推荐摄入量为400微克，各阶段的产妇为每天600微克，叶酸的每日最高允许摄入量均为1000微克。

巨幼红细胞贫血：巨幼细胞贫血(MA)是由于缺乏叶酸或维生素B12而引起的脱氧核糖核酸合成障碍而导致的一种贫血，以婴孩与孕妇多见。正常发育的胎儿要求母亲体内有大量的叶酸储备，如果在临产或产后早期叶酸储备耗尽，导致胎儿和母亲巨幼细胞贫血，补充叶酸后，本病可迅速恢复和治愈。

叶酸与唇腭裂：唇腭裂(CLP)是最常见的先天性出生缺陷畸形之一，唇腭裂的发病原因还不明确，事实证明母孕早期补充叶酸可预防唇腭裂儿的出生。有学者研究了179例唇腭裂家庭和204例对照家庭，发现未补充叶酸或者低叶酸饮食的母亲，生出唇腭裂孩子的风险比正常补充叶酸的家庭大约高6倍。

其他疾病：叶酸缺乏会给母亲和孩子带来很大伤害，例如，习惯性流产、早产、婴儿出生体重过低、胎儿消化不良及生长迟缓等。许多文献报道，老年期痴呆症、抑郁症及新生儿的神经系统发生异常等有关脑病变疾病，都与叶酸的缺乏有着一定的关联。另外，缺乏叶酸还可能引起肿瘤(子宫癌、支气管癌、食道癌、大肠癌等)、慢性萎缩性胃炎、结肠炎、冠心病和脑血管疾病等多种疾病，以及其他如舌炎、生长不良、智力退化等症状。成年人若缺乏叶酸又饮酒过量可能会改变其肠黏膜的结构。

叶酸对以上疾病均有预防的治疗作用，除了NTDs外，补充叶酸即可使机体恢复健康，这种叶酸与疾病间的可逆关系在临床上非常重要。