[发明专利]一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法

说明书

本发明提供了一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法,本发明使用盐和过滤淡水配制培养液，培养产河豚毒素细菌，对产河豚毒素微生物进行培养，盐水中的氯离子浓度减少，从而降低了对钢材发酵罐的腐蚀,避免配制发酵培养液对海水的依赖，从而对通过发酵的方法，量产河豚毒素提供了新的尝试途径；培养液中的配方组成简化，为减少工业化发酵生产河豚毒素的成本创造了条件；利用本发明的培养液对微生物进行大容量的发酵培养，为河豚毒素的产业化奠定了基础。

技术领域

本发明涉及海洋微生物发酵技术领域，具体而言，特别涉及一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法。

背景技术

河豚毒素是存在于产河豚毒素鱼类（俗称河豚鱼）及其他生物体内（如一些藻类或微生物）的一种生物碱类天然毒素。河豚毒素是属于毒性最强的一类天然毒素，其毒性比氰化钠还强1000倍。河豚毒素是典型的钠离子通道阻断剂，它能选择性与肌肉、神经细胞的细胞膜表面的钠离子通道受体结合，阻断电压依赖性钠离子通道，从而阻滞动物电位，抑制神经肌肉间兴奋的传导，导致相关的生理机能的障碍，主要造成肌肉和神经的麻痹。

中国是全世界河豚鱼产量最多的国家，现初步查明的全球54种中，中国有35种，大部分为东方鲀属，分布在东海、黄海、渤海等水域。年产量约在3-4万吨，占世界河豚鱼总产量的70%左右。随着几种主要东方鲀品种的人工繁殖与苗种培育的成功，加速推进了中国河豚鱼人工养殖的发展。

如图1河豚毒素的分子结构图所示，河豚毒素的英文名称：Tetrodotoxin，缩写作TTX。分子式C11H17N3O8，分子量 319.27。化学名称：八氢-12-(羟甲基）-2-亚氨基_5，9，7，IOa-二甲基-10aH-[l，3] 二氧桥[6,5-d]嘧啶-4，7，10，11，12-五醇。

河豚毒素主要用于镇痛和戒毒，也可以用于治疗外伤性疼痛、神经性疼痛、癌症疼痛、术后疼痛，还有治疗皮肤病如湿疹、癣、疥等，还有去腐生新的作用如烧伤、烫伤、疖、痈等的治疗，在壮阳及治疗女性性冷淡方面也有良好的疗效，也有关于治疗高血压等相关的报道。河豚毒素的主要特点就是它不具备成瘾性，因此得到广泛用途。

河豚毒素的生产目前有三种途径，一种就是传统意义上的从河豚鱼内脏提取分离的办法，该方法步骤繁琐、得率低、产品纯度有限，而且大量消耗河豚资源，对生态环境造成破坏。第二种途径是用化学方法人工合成，但步骤冗长、难度大，目前尚无实际应用价值。第三种途径就是通过微生物发酵的方法获得河豚毒素，但是这种方法的局限是产品水平低下、菌种遗传特征不稳定。以上这些因素严重制约河豚毒素的产量。

由于河豚毒素有广泛的用途，但其产量有限，因此该产品在市场上供不应求、价格高昂。许多企业和研究机构都投入大量人力物力，企图找到解决这一难题的途径。到目前为止，效果并不明显。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法，所述培养液包括盐水、葡萄糖、磷酸高铁、氮源，所述盐水为重量比为0.03%-5.55%的氯化钠溶解于过滤的淡水中，溶解后的经过0.45μm滤膜过滤，在黑暗中存放10-40天后，即得盐水，盐水的酸碱度为pH4.0-7.0。

作为优选方案，所述氮源为蛋白胨和酵母粉中的一种或多种。

进一步地，所述氮源为蛋白胨的重量比为0.01%-1.00%,培养液酸碱度为pH4.5-7.0。

进一步地,所述氮源为酵母粉的重量比为0.10%-3.00%,培养液酸碱度为pH4.0-6.5。

进一步地,所述氮源为蛋白胨和酵母粉的混合物，蛋白胨的重量比为0.01%-0.5%，酵母粉的重量比为0.05%-2.50%,培养液酸碱度为pH4.0-7.0。