[发明专利]一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液及其发酵方法

权利要求书

1.一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液，其特征在于,所述培养液包括盐水、葡萄糖、磷酸高铁、氮源，所述盐水为重量比为0.03%-5.55%的氯化钠溶解于过滤的自来水中，溶解后的经过0.45μm滤膜过滤，在黑暗中存放10-40天后，即得盐水，盐水的酸碱度为pH4.0-7.0。

2.根据权利要求1所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述氮源为蛋白胨和酵母粉中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述氮源为蛋白胨的重量比为0.01%-1.00%,培养液酸碱度为pH4.5-7.0。

4.根据权利要求2所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述氮源为酵母粉的重量比为0.10%-3.00%,培养液酸碱度为pH4.0-6.5。

5.根据权利要求2所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述氮源为蛋白胨和酵母粉的混合物，蛋白胨的重量比为0.01%-0.5%，酵母粉的重量比为0.05%-2.50%,培养液酸碱度为pH4.0-7.0。

6.根据权利要求1所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述葡萄糖的重量比为0.01%-1.00%。

7.根据权利要求1所述的一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液,其特征在于,所述磷酸高铁的重量比为0.001%-1.000%。

8.如权利要1-7所述一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液的发酵方法，其特征在于,包括以下步骤：

步骤（1）：活化：保存于-80℃超低温冰箱中的海洋细菌，用接种环接种于2216E固体培养基，恒温培养箱23℃培养36h；

步骤（2）：初级培养：挑选单个的菌落，接种于5mL培养液，恒温摇床培养；

步骤（3）：次级培养：初级培养物接种于500mL培养液，恒温摇床培养；

步骤（4）：种子发酵：次级培养物接种于6升培养液于10升316L不锈钢发酵罐内进行发酵，发酵时间为30-36h，搅拌器转速为130-160rpm，溶氧60%-70%；

步骤（5）：初级发酵：种子发酵物接种于60升培养液于100升316L不锈钢发酵罐内进行发酵，发酵时间为36-48h；

步骤（6）：终极发酵：初级发酵物接种于600升培养液于1000升316L不锈钢发酵罐内进行发酵，发酵时间为48-72h；

步骤（7）：发酵液经初步过滤及浓缩后，用醋酸调节至pH4.0。

9.根据权利要求8所述一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液的发酵方法,其特征在于,所述步骤（1）中的海洋细菌为海洋芽孢杆菌。

10.根据权利要求8所述一种用于产河豚毒素海洋微生物的培养液的发酵方法,其特征在于,所步骤（1）采用摇床培养，培养温度在15-30℃，摇床转速为50-300rpm，培养时间24-96h。