[发明专利]一种检测多种肠道微生物代谢物的定量分析方法及试剂盒

权利要求书

1.一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，其特征在于，包括：

(1)质控品，所述质控品含乙酰左旋肉碱、甜菜碱醛、甜菜碱、氯化胆碱、盐酸巴豆甜菜碱、γ-丁基甜菜碱、左旋肉碱、三甲胺盐酸盐、三甲基赖氨酸和氧化三甲胺；

(2)同位素内标提取液，所述同位素内标提取液含有乙酰左旋肉碱-D3、甜菜碱-D11、氯化胆碱-D9、左旋肉碱-D9、三甲胺-D10和氧化三甲胺-D9甲醇；

(3)增强剂，所述增强剂包括组分(a)溴乙酸叔丁酯和乙腈；和组分(b)碳酸钠；

(4)提取溶剂，所述提取溶剂包括组分(i)乙腈和组分(ii)乙酸；

(5)流动相添加剂A，所述流动相添加剂A包括甲酸；以及

(6)流动相添加剂B，所述流动相添加剂B包括氨水。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在所述增强剂的所述组分(a)中，溴乙酸叔丁酯的浓度为25-45mmol/L。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在所述增强剂的所述组分(b)中，碳酸钠的浓度为0.1-0.5mol/L，较佳地，0.2-0.4mol/L。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述提取溶剂中，所述组分(ii)的体积比(v/v)为1.0-3.0％，较佳地1.5-2.5％。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括(7)对照品，所述对照品含乙酰左旋肉碱、甜菜碱醛、甜菜碱、氯化胆碱、盐酸巴豆甜菜碱、γ-丁基甜菜碱、左旋肉碱、三甲胺盐酸盐和三甲基赖氨酸和氧化三甲胺。

6.一种通过高效液相色谱质谱联用法测定所取的生物样品中一种或多种肠道微生物代谢物的量的方法，其特征在于，包括：

(i)通过电喷雾离子源(ESI)对所述一种或多种肠道微生物代谢物和内标进行电离，分别产生所述一种或多种肠道微生物代谢物和所述内标的至少一种前体离子；

(ii)分别产生所述一种或多种肠道微生物代谢物和所述内标的所述前体离子的一种或多种碎片离子；和

(iii)比较步骤(i)或(ii)或两者中产生的所述一种或多种肠道微生物代谢物和所述内标的一种或多种所述离子的量以确定所述生物样品中的所述一种或多种肠道微生物代谢物的量；

其中，色谱检测过程中的流动相中加入甲酸和氨水。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述质谱为串联质谱。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述一种或多种肠道微生物代谢物包括乙酰左旋肉碱，且其中所述乙酰左旋肉碱的所述母离子的质/荷比为204.00＞85.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括甜菜碱醛，且其中所述甜菜碱醛的所述母离子的质/荷比为101.95＞58.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括甜菜碱，且其中所述甜菜碱的所述母离子的质/荷比为118.10＞58.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括氯化胆碱，且其中所述氯化胆碱的所述母离子的质/荷比为104.15＞58.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括盐酸巴豆甜菜碱，且其中所述盐酸巴豆甜菜碱的所述母离子的质/荷比为144.00＞58.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括γ-丁基甜菜碱，且其中所述γ-丁基甜菜碱的所述母离子的质/荷比为146.00＞87.05；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括左旋肉碱，且其中所述左旋肉碱的所述母离子的质/荷比为162.10＞60.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括三甲胺盐酸盐，且其中所述三甲胺盐酸盐的所述母离子的质/荷比为174.10＞59.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括三甲基赖氨酸，且其中所述三甲基赖氨酸的所述母离子的质/荷比为189.20＞84.10；和/或

所述一种或多种肠道微生物代谢物包括氧化三甲胺，且其中所述氧化三甲胺的所述母离子的质/荷比为76.15＞58.15。