[发明专利]一种黑曲霉孢子的稳定剂及其应用

说明书

本发明提供一种黑曲霉孢子的稳定剂，溶剂为水，其溶质包含L‑肌肽、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、蔗糖、聚乙二醇和聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。本发明的黑曲霉质控菌的稳定剂，可使质控菌冻干存活率达到80％以上，且能够在长期储存过程中保持菌含量的稳定性。

技术领域

本发明属于微生物质量控制领域，尤其涉及一种黑曲霉孢子的稳定剂及其应用。

背景技术

黑曲霉是曲霉属真菌中的一个常见种，广泛存在于粮食、土壤和植物性产品中，可引起食物、谷物和谷蔬的霉腐变质，有的可产生致癌性的黄曲霉毒素，此外黑曲霉极易通过空气扩散污染环境，对产品的生产和检验构成威胁。因此现行的食品微生物检验以及中国药典等多项国家标准均需进行霉菌的检验。而质控菌株作为微生物检验中的阳性对照，能够验证检验方法、对检验人员进行能力验证、验收微生物培养基，保证微生物实验过程的质量控制，是微生物检验过程中的标准物质。

市场上关于黑曲霉的质控菌株多为定性菌株，没有固定的含菌量，使用者需进行复苏、传代稳定后进行稀释菌液，制备符合实验菌含量的菌悬液。大大增加了使用者的检验时间，且受专业技术等因素影响，部分使用者需多次实验才能稀释到所需菌细胞的数量，加大了人工成本以及时间成本，故提供定量的质控菌株能够提高使用者的检验效率，减少不必要的重复实验,保障质控过程的顺利进行。现有定量的黑曲霉质控菌种产品，因为技术有限，保质期较短，无法避免在运输和储存期间菌细胞数量发生变化，影响微生物检验过程质量的控制。如中国专利CN106929421A，制备出的定量微生物在-20℃条件下保存期限为至少3个月，无法满足长时间的需求。又如中国专利CN109797108A所述的黑曲霉适用性试验菌株的制备方法，菌含量范围为500-2000CFU/支，范围较大不利于使用，此外该制备方法使用营养琼脂产孢能力差，洗脱的菌苔未进行菌丝体处理，该方法不可持续生产定量质控菌。此外，稳定剂是菌株在冷冻干燥过程保护细胞的有效物质，由于不同的菌株生理代谢特性不同，在冷冻干燥过程中抗逆能力不同，因此在保护剂选择上有各自的偏好，因此需对不同种类的菌株进行筛选，以便得到效果最好的稳定剂。目前还未有一种稳定剂能够使黑曲霉孢子粉在冻干过程不受损失，且提高孢子粉在长期储存以及短期运输过程的稳定性。因此，提供一种黑曲霉冻干孢子粉的稳定剂及黑曲霉定量质控菌的制备方法，具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种黑曲霉孢子的稳定剂及其应用。

本发明所采用的技术方案为：

本发明的第一个方面，提供：

一种黑曲霉孢子的稳定剂，溶剂为水，其溶质包含以下原料：L-肌肽、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、蔗糖、聚乙二醇、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。

在一些实施例中，其溶质的质量组成为：3-5份L-肌肽、0.5-1份4-羟乙基哌嗪乙磺酸、5-10份蔗糖、1-5份聚乙二醇、0.05-0.3份聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。

在一些实施例中，其溶质的质量组成为：3％-5％L-肌肽、0.5％-1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸、5％-10％蔗糖、1％-5％聚乙二醇、0.05％-0.3％聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。

本发明的第二个方面，提供：

一种黑曲霉孢子定量化质控品，由黑曲霉孢子与上述的稳定剂混匀后，定量后分装、冻干得到。

在一些实施例中，黑曲霉孢子与稳定剂(干重)的混合比为300-1000CFU/(0.1-0.3)g稳定剂(干重)。这样可以保证细菌可以充分被稳定剂保护，同时也不会过于浪费稳定剂。

在一些实施例中，上述的定量化质控品中黑曲霉的含量为300-1000CFU/瓶。当然，也可以根据实际的需要，选择其他的含量。该孢子含量的偏差不大于20％。

本发明的第三个方面，提供：

一种黑曲霉定量质控品的制备方法，包括如下步骤：