[发明专利]牛冠状病毒HE基因重组株及其制备的灭活疫苗和应用

说明书

本发明提供一株牛冠状病毒HE基因重组株及其制备的灭活疫苗和应用，该牛冠状病毒HE基因重组株于2019年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO:V202016，分类命名：牛冠状病毒BCoV‑LNA1‑SWUN7901。可用于制备牛冠状病毒疫苗，并且疫苗的制备方法包括：增殖所述牛冠状病毒HE基因重组株BCoV‑LNA1株，收获病毒液，离心，取上清液；将病毒上清液加入灭活剂进行灭活；将灭活的病毒上清液与佐剂混合，乳化。本发明分离到一株牛冠状病毒HE基因重组株BCoV‑LNA1株，利用其制备的牛冠状病毒灭活疫苗，具有产生抗体效价高，抗体水平上升快等优点。

技术领域

本发明属于病毒分离与应用技术领域，具体涉及一株牛冠状病毒HE基因重组株及其制备的灭活疫苗和应用。

背景技术

牛冠状病毒(BovineCoronavirus,BCoV)于1972年由美国Stair和Mebus 等在腹泻奶牛的粪便中发现，证明是导致奶牛腹泻的重要病原之一(Jonsson E,ConwayP.Probiotics for pigs[J].Springer Netherlands,1992.)。1990年，姚火春等在犊牦牛腹泻中发现牦牛冠状病毒的存在，并表明牦牛冠状病毒可能是引起牦牛腹泻的重要病因(姚火春,杜念兴.牛冠状病毒的血清流行病学调查[J].南京农业大学学报,1990,13(2):117-121.)。牛冠状病毒能够引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和呼吸道疾病，该病毒在世界范围内流行，给养牛业造成了巨大的经济损失。

目前，对于牛冠状病毒病的防控没有特别有效的防控手段，接种疫苗是预防牛冠状病毒的最好、最直接的方法。最新研究表明，牛冠状病毒HE基因的酯酶和凝集素结构域之间的重组事件发生频率很高，这些重组毒株在我国奶牛中普遍存在(Keha Abi,Xue Luo,Yan Shen,et al.Prevalence of a novel bovine coronavirus strain with arecombinant hemagglutinin/esterase gene in dairy calves in China.[J].Transboundary and emerging diseases,2019.)。HE基因的重组可能会导致对牛冠状病毒的抗原性发生改变。目前市售的疫苗都是以没有发生重组事件的Mebus株为原型毒株设计制造的，这可能导致对我国牛冠状病毒流行株无法产生好的保护效果，所以，以HE基因发生重组的牛冠状病毒制备灭活疫苗，对牛冠状病毒病的预防有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一株牛冠状病毒HE基因重组株及其制备的灭活疫苗和应用。本发明的技术方案为：

第一方面，本发明提供了一株牛冠状病毒HE基因重组株，命名为 BCoV-LNA1株，该菌株于2019年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国，北京，CCTCCNO:V202016，分类命名：牛冠状病毒BCoV-LNA1-SWUN7901。

进一步的，所述BCoV-LNA1株的病毒含量≥10^7.75TCID₅₀/mL。

第二方面，本发明提供了上述HE基因重组株在制备牛冠状病毒疫苗中的应用。

第三方面，本发明提供了采用上述HE基因重组株制备的牛冠状病毒疫苗。

进一步的，所述牛冠状病毒疫苗包括：预防上有效量的灭活的所述牛冠状病毒HE基因重组株BCoV-LNA1株和药学上可接受的佐剂。

第四方面，本发明提供了上述牛冠状病毒疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)增殖所述牛冠状病毒HE基因重组株BCoV-LNA1株，收获病毒液，离心，取上清液；

(2)将病毒上清液加入灭活剂进行灭活；