[发明专利]一种鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物及应用

说明书

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲤冠状病毒HL39的RT‑RPA检测引物及应用。本发明是针对保藏编号为CCTCC NO：V201988的鲤冠状病毒HL39设计的RT‑RPA检测引物，包括特异性引物和探针本发明具有操作简便、反应快速、高特异性和灵敏性的特点，不需大型仪器设备，30分钟内即可准确检测出样品中的鲤冠状病毒HL39，最低检测限可达4.9 fg/μL的RNA模板，非常适用于现场快速检测和大规模筛查。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物及应用。

背景技术

套式病毒目(Nidovirales)于1996年首次由国际病毒分类委员会(InternationalCommitt ee on Taxonomy of Viruses,ICTV)提出，该目病毒宿主广泛，可引起哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼虾等水生动物多种重大疾病。套式病毒目冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。由冠状病毒科的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起的非典型性肺炎，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。

2018年ICTV调整了套式病毒目的分类，新增了Abyssoviridae、Medioniviridae、Mono niviridae、Euroniviridae和Tobaniviridae等5个病毒科，其中在Tobaniviridae科下新增Onc otshavirus属。2017年，申请人发表了鲫冠状病毒的相关研究成果，目前鲤冠状病毒(Cypr inid Nidovirus,CyNV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。

申请人首次从鲤鱼病变组织中分离出一株鲤冠状病毒，针对该病毒，设计了RT-RPA反应引物，从而实现鲤冠状病毒的快速、精确检测。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物，所述的引物为：HL39-F：5，-GGAAAACCTCTTACACTCTGCCCCTTTACCTACT-3，和HL39-R：5，-AGTGCCGGTGGTTGAGAGCTTGTAGGACGTTCT-3，，所述病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201988。

本发明的另一个目的在于提供了一种鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物的应用，利用该引物，可制备成鲤冠状病毒HL39的检测试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物，所述的引物为：HL39-F：5，-GGAAAACCTCTTACACTCTGCCCCTTTACCTACT-3，和HL39-R：5，-AGTGCCGGTGGTTGAGAGCT TGTAGGACGTTCT-3，，所述病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201988。

鲤冠状病毒HL39的RT-RPA检测引物在制备成鲤冠状病毒HL39的检测试剂盒中的应用；

以上所述的应用中，优选的，所述的鲤冠状病毒HL39的检测试剂盒包括：

Tris-HCl，醋酸钾，醋酸镁，dNTPs，肌酸激酶，磷酸肌酸，二硫苏糖醇，ATP，PEG35K，引物HL39-F和HL39-R，探针，Uvs X，Uvs Y，聚合酶Bsu，gp32单链结合蛋白，外切酶Ⅲ，反转录酶，RNA模板。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：