[发明专利]由糖蛋白制备糖链的方法、试剂盒和装置

权利要求书

1.由糖蛋白制备糖链的方法，其包括：

(I)使包含羟胺化合物和碱性试剂的糖链游离溶液接触所述糖蛋白，使糖链自所述糖蛋白游离，得到含糖链样品的工序；(II)使所述含糖链样品接触纯化剂，使所述糖链吸附至所述纯化剂的工序，所述纯化剂包含具有内铵盐结构的化合物，且用于提纯长度为单糖以上的糖链；(III)使所述糖链自所述纯化剂溶出的工序。

2.根据权利要求1的方法，其还包括：(IV)使糖链标记溶液中的糖链标记试剂与糖链反应的糖链标记工序。

3.根据权利要求2的方法，其还包括：(V)与包含还原试剂的还原溶液反应的还原工序。

4.根据权利要求3的方法，其中，所述还原溶液中的所述还原试剂的浓度为1.0mmol/L以上且250mmol/L以下。

5.根据权利要求1~4中任一项所述的方法，其中，所述糖链游离溶液中的羟胺类为2%以上且70%以下。

6.根据权利要求1~5中任一项所述的方法，其中，所述羟胺化合物为选自羟胺、羟胺的盐、O取代羟胺和O取代羟胺的盐中的至少一种。

7.根据权利要求1~6中任一项所述的方法，其中，所述碱性试剂为选自碱金属的氢氧化物、碱金属的弱酸盐、碱土金属的氢氧化物、溶解于氨水溶液的碱土金属的盐和有机碱中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述碱金属的氢氧化物为氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，所述碱金属的弱酸盐为碳酸氢钠或碳酸钠，所述碱土金属的氢氧化物为氢氧化钙、氢氧化钡或氢氧化锶，所述碱土金属的盐为乙酸钙、氯化钙、乙酸钡或乙酸镁，所述有机碱为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯、1,1,3,3-四甲基胍、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍或鲸蜡基三甲基氢氧化铵。

9.根据权利要求1~8中任一项所述的方法，其中，所述纯化剂包含所述具有内铵盐结构的化合物作为有效成分。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述纯化剂是主链上键合有具有所述内铵盐结构的侧链的聚合物被固定于不溶性支撑体而成的糖链浓缩载体。

11. 用于由糖蛋白制备糖链的试剂盒，其包含：

(a)羟胺化合物、

(b)碱性试剂、

(c)纯化剂，其包含具有内铵盐结构的化合物，且用于提纯长度为单糖以上的糖链。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其还包含(d)糖链标记试剂。

13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其中，所述羟胺化合物为选自羟胺、羟胺的盐、O取代羟胺和O取代羟胺的盐中的至少一种。

14.根据权利要求11~13中任一项所述的试剂盒，其中，所述碱性试剂为选自碱金属的氢氧化物、碱金属的弱酸盐、碱土金属的氢氧化物、溶解于氨水溶液的碱土金属的盐和有机碱中的至少一种。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其中，所述碱金属的氢氧化物为氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，所述碱金属的弱酸盐为碳酸氢钠或碳酸钠，所述碱土金属的氢氧化物为氢氧化钙、氢氧化钡或氢氧化锶，所述碱土金属的盐为乙酸钙、氯化钙、乙酸钡或乙酸镁，所述有机碱为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯、1,1,3,3-四甲基胍、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍或鲸蜡基三甲基氢氧化铵。