[发明专利]用于依次检测靶标的方法和组合物

说明书

本文提供了用于检测多个靶标的组合物、试剂盒和方法。提供了一种探针组组合物，其包含一个或多个第一探针和一个或多个第二探针。每个所述第一探针包含与相应靶标特异性结合配偶体的核酸条形码互补的核酸序列、第一标签和用于第一裂解剂的裂解位点，其中所述第一裂解剂能够释放所述第一标签。每个所述第二探针包含与相应靶标特异性结合配偶体的核酸条形码互补的核酸序列、第二标签、使所述第二标签不可检测的淬灭部分和用于所述第一裂解剂的裂解位点。所述第一裂解剂能够释放所述淬灭部分，从而使得所述第二标签可检测。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年12月14日提交的美国临时申请号62/780,038的优先权益，所述申请的内容出于任何目的以引用的方式整体并入本文。

序列表

本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表以文件形式提供，所述文件标题为“2019-12-11_01168-0019-00PCT_SEQ_List_ST25.txt”，创建于2019年12月11日，大小为8,192字节。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。

引言

本申请总体上涉及分析物(例如靶标)的检测领域，并且具体地涉及用于检测多个靶标的组合物、试剂盒和方法。

近年来，用于检查组织样品中的生物相关分子(称为生物标记物)的方法已得到改进。检测逐渐增加数量的生物标记物的能力允许对组织结构进行更复杂的表征，从而使临床医生可以通过检查组织样品来更好地了解并预测个体的健康状况。而先前的方法包括一次检查一个生物标记物，多重免疫组织化学(IHC)允许对单个组织样品中的多个生物标记物进行空间分析。IHC包括使抗体结合至生物标记物、将荧光标记物附接至抗体(其中每个生物标记物通过不同颜色的荧光标记物识别)以及使用荧光显微镜对样品成像。

DNA交换成像是用于对组织样品中的生物标记物进行多重检测的成熟方法，其采用了多轮组织处理。首先，将DNA条形码化抗体施用于样品，并使其与相应靶标结合。接下来，将“成像链(imager strand)”施用于样品；这与靶标之一的DNA条形码结合。将盖玻片置于样品上，并且然后使用荧光显微镜检测成像链。接下来，移除盖玻片；处理样品以移除成像链，并且将第二成像链施用于样品；其结合至到第二DNA条形码。然后检测第二成像链。再次移除盖玻片，并处理样品，以移除第二成像链，以准备第三轮。可以重复此过程以检测逐渐增加数量的生物标记物。

因此，DNA交换成像需要在每轮检测前施用新的成像链。施用一些通过多轮检测有效起作用的成像链将减少完成分析所需要的操作量(并且因此减少时间)。如果可以避免移除盖玻片，则将进一步减少此种操作。

发明内容

根据说明书，提供了用于依次检测样品中的靶标的方法和组合物。

因此，提供了根据本文描述的方法和组合物的以下实施方案。

实施方案1.一种用于检测多个靶标分子的方法，所述方法包括：

(a)使样品与两个或更多个靶标特异性结合配偶体接触，其中每个靶标特异性结合配偶体包含核酸条形码；并且对不同的靶标分子具有特异性；

(b)使所述样品与一个或多个探针组接触，其中探针组中的每个探针对不同的靶标特异性结合配偶体具有特异性，并且其中每个探针组包含：

第一探针，其包含：

与相应靶标特异性结合配偶体的核酸条形码互补的核酸序列；

第一标签；和

用于第一裂解剂的裂解位点，其中所述第一裂解剂能够释放所述第一标签，和

第二探针，其包含：

与相应靶标特异性结合配偶体的核酸条形码互补的核酸序列；