[发明专利]经遗传修饰的禽及其重构方法

权利要求书

1.一种转基因构建体，其包含:

(i)第一核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列编码细胞凋亡诱导酶，其中所述细胞凋亡诱导酶是Caspase，其中由所述第一核苷酸序列编码的蛋白质的活性在外源诱导剂的存在下导致生殖细胞死亡；和

(ii)第二核苷酸序列，所述第二核苷酸序列将所述转基因构建体靶向禽生殖细胞，其中所述第二核苷酸序列靶向DAZL位点。

2.根据权利要求1所述的转基因构建体，其中所述第一核苷酸序列包含细胞凋亡诱导结构域，并且其中所述外源诱导剂是能够激活所述细胞凋亡结构域以引起生殖细胞凋亡的二聚化剂。

3.根据权利要求1或2所述的转基因构建体，其中所述外源诱导剂选自AP20187配体或AP20187配体的化学变体FK1012、AP1501、AP1903。

4.根据权利要求2所述的转基因构建体，其中所述外源诱导剂是二聚化稳定药物。

5.根据权利要求1或2所述的转基因构建体，其中所述Caspase选自哺乳动物Caspase9、aviCaspase9或iCaspase 9。

6.根据权利要求1或2所述的转基因构建体，其中所述第二核苷酸序列通过同源重组到仅在禽生殖细胞中表达的基因位点来将所述转基因构建体靶向生殖细胞。

7.根据权利要求1或2所述的转基因构建体，其中所述第二核苷酸序列通过CRISPR/Cas系统靶向生殖细胞，其中所述转基因构建体包含靶向生殖细胞特异性序列的向导RNA。

8.一种用于修饰禽种质的方法，所述方法包括将转基因构建体施用到所述禽的受精卵或培养的生殖细胞中，并孵育含有所述转基因构建体的所述受精卵或用含有所述转基因构建体的生殖细胞注射，其中所述转基因构建体是根据权利要求1至7中任一项所述的转基因构建体，并且其中所述转基因构建体整合到胚胎的生殖细胞中。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述方法是产生替代宿主禽的方法，所述方法包括施用所述外源诱导剂从而导致所述生殖细胞死亡的步骤。

10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中所述方法还包括将来自供体禽的生殖细胞移植到所述受精卵中并孵育至孵化以产生具有所移植的生殖细胞的遗传同一性的后代禽的步骤。

11.根据权利要求10所述的方法，还包括使来自所述后代禽的雄性和雌性后代杂交，以产生一个或更多个具有所移植的生殖细胞的遗传同一性的生殖细胞的后代禽后续世代。

12.一种转基因禽，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的转基因构建体或是通过权利要求8至11中任一项所述的方法产生的。