[发明专利]用于酵母的前导序列

说明书

本发明涉及促进重组蛋白分泌的前导肽和编码所述前导肽的核酸序列以及包括这种前导序列的表达盒、载体和宿主细胞。还公开了一种用于使用所述前导肽产生蛋白质的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年11月19日提交的美国申请第62/769,242号的优先权权益，所述美国申请的内容通过引用整体并入本文。

序列表

本申请包含根据“按照专利合作条约(PCT)在国际专利申请中呈现核苷酸和氨基酸序列表的标准(Standard for the Presentation of Nucleotide and Amino AcidSequence Listings in International Patent Applications Under the PatentCooperation Treaty(PCT))”ST.25以ASC II文本(.txt)文件呈计算机可读形式(CRF)的核苷酸和氨基酸序列表。序列表在以下鉴别出，并且以全文引用的方式并且出于所有目的并入本申请的本说明书中。

文件名	创建日期	大小(字节)
180263US01_SequenceListing.txt	11/16/2018	32KB(32,847个字节)

技术领域

本发明涉及促进从宿主细胞分泌重组蛋白的前导肽和编码所述前导肽的核酸序列以及包括这种前导序列的表达盒、载体和宿主细胞。还公开了一种用于使用所述前导肽产生蛋白质的方法。

背景技术

法夫驹形氏酵母(Komagataella phaffii)(以前被称为巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris))是一种易于操作和培养的单细胞微生物。法夫驹形氏酵母是一种真核生物，其能够进行由高级真核细胞进行的许多翻译后修饰，如蛋白水解加工、折叠、二硫键形成和糖基化。因此，相比于无法像真核细胞那样进行翻译后修饰的细菌系统，优选法夫驹形氏酵母系统。进一步地，在细菌系统中，如果可能的话，蛋白质可能以不溶形式产生，这需要昂贵的工艺来重新折叠和回收蛋白质。另外，已经证明，与许多细菌系统相比，法夫驹形氏酵母系统可提供更多的可溶性和相对纯净的分泌蛋白。因此，可以将需要翻译后修饰的外来蛋白质产生为法夫驹形氏酵母中的生物活性分子，并且法夫驹形氏酵母已被用于产生多种重组蛋白。

由于大多数酵母不会分泌大量内源蛋白，而且到目前为止，它们的细胞外蛋白质组尚未得到广泛表征，因此可用于酵母的分泌序列的数量有限。因此，通常将靶蛋白与来自酿酒酵母(S.cerevisiae)的交配因子α(MFa)的前导肽融合，以驱动许多酵母物种中的分泌表达(Kurjan和Herskowitz(1982)《细胞学》(Cell)30(3):933-943)。然而，Kex2蛋白酶对MFa的蛋白水解加工通常会在产物中产生异质的N端氨基酸残基。